QKI-5上调上皮间充质转化而促进肾癌转移的分子机制及临床意义研究

For renal cell carcinoma(RCC) patients, distant metastasis remains the major cause of treatment failure. Quaking (QKI) as a RNA binding protein, broadly promotes mesenchymal splicing patterns during the epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) process. Our preliminary experiments firstly find that QKI-5 closely related to RCC metastasis in clinical samples. In virto, we found QKI-5 protein promote cell migration and invasion in RCC. So we make a scientific hypothesis: QKI-5 has the role of promoting metastasis of RCC by upregulating EMT. This project will explore, through metastasis model in nude mice and clinical specimens, that the relationships between QKI-5 and RCC cells of EMT process, and to confirm that QKI-5 can promote the metastasis of RCC. Completion of this project will predict the prognosis of RCC patients, as well as provide new target of prevention and cure of RCC with distant metastasis.

远处转移是肾癌治疗失败的主要原因。QKI作为一种RNA结合蛋白，可通过广泛促进间充质RNA剪切的方式促进上皮-间充质转化。通过对同一肾癌患者原发灶及转移灶标本免疫组化方法检测，我们首次发现同一肾癌患者其转移灶中QKI-5表达水平比原发灶显著升高，进一步的细胞实验中发现QKI-5可以促进肾癌细胞的迁移和侵袭。我们因此提出了QKI-5上调上皮-间充质转化从而调控肾癌细胞的迁移、侵袭和转移能力的科学假说。通过应用裸小鼠尾静脉注射远处转移模型和临床标本检测，本项目将探讨QKI-5与肾癌转移和预后的关系，识别QKI-5调控的上皮-间充质转化过程中的关键分子，证实QKI-5具有促进肾癌转移的作用。本项目的完成将有助于阐明QKI-5调控肾癌转移的分子机理, 为预测患者的预后以及防治肾癌的远处转移提供新的靶点。

远处转移是肾癌治疗失败的主要原因。QKI作为一种RNA结合蛋白，可通过广泛促进间充质表型RNA剪切的方式促进上皮-间充质转化。通过对同一肾癌患者原发灶及转移灶标本免疫组化方法检测，我们发现同一肾癌患者其转移灶中QKI-5表达水平比原发灶显著升高，进一步的细胞实验中发现QKI-5可以促进肾癌细胞的迁移和侵袭。我们因此提出了QKI-5上调上皮-间充质转化从而调控肾癌细胞的迁移、侵袭和转移能力的科学假说。本项目采用qRT-PCR和western blot检测QKI-5在局部晚期KIRC组织和不同细胞系中的表达差异。分别使用wound healing和transwell assays测定QKI-5敲低及过表达后肾癌细胞的迁移和侵袭能力变化情况。运用生物信息学分析方法，识别对QKI-5的表达起关键调控作用的microRNA。研究发现：QKI-5在中晚期肾癌组织中表达增加且与肾癌的预后相关。QKI-5的表达上调促进了肾癌细胞的迁移和侵袭，增加了上皮-间充质转化(EMT)标记蛋白Vimentin、snail和slug的表达，而E-cadherin的表达下调。双荧光素酶报告基因实验表明，QKI-5是miR-200c的直接靶点，而miR-200c可以逆转QKI-5对细胞迁移、侵袭的作用和EMT标记蛋白表达的影响。以上结果表明：miR-200c通过下调QKI-5的表达，影响EMT过程减弱KIRC的迁移和侵袭，提示QKI-5可能是一个潜在的治疗靶点和KIRC进展的关键指标。本项目的完成将有助于阐明QKI-5调控肾癌转移的分子机理, 为预测患者的预后以及防治肾癌的远处转移提供新的靶点。