Mfn2基因预防移植物慢性排斥反应的作用及机制

慢性排斥反应导致移植物慢性失功，一直是影响移植物长期存活的主要原因。慢性排斥反应的共同组织学表现即移植物动脉硬化，而血管平滑肌细胞（VSMC）是移植物慢性血管病变的主要效应细胞，故从基因水平特异性的抑制VSMC的增生，对防治移植物慢性失功具有重大的临床意义。.因此，本课题应用转基因技术，体外转染线粒体融合蛋白基因2（Mfn2）到发生慢性排斥的大鼠移植腹主动脉VSMC，探讨Mfn2基因对VSMC增殖的影响；并利用大鼠心脏移植慢性排斥反应模型，术前Mfn2基因转染供心，通过分析术后移植心VSMC的含量及表型变化、细胞外基质蛋白等的表达情况，探讨Mfn2基因转染对移植心脏慢性排斥反应的影响。.预期通过对腹主动脉和心脏移植慢性排斥反应模型的研究，特异性的抑制VSMC的活化和增生，为今后移植物慢性失功的防治提供新的思路。

近年来，器官移植已成为治疗如晚期心脏衰竭、晚期肝功能紊乱和晚期肾衰竭等终末期疾病的较为成熟和有效的手段。尽管免疫抑制剂的使用大大降低移植物急性排斥反应的发生率，然而移植物慢性排斥反应仍然是影响器官移植患者远期生存最重要因素之一。. 大量前期研究证明线粒体融合蛋白基因2（Mfn-2）具有抑制血管平滑肌细胞（VSMC）的增殖的功能，从而减轻血管动脉粥样硬化和手术后再狭窄；且有实验证明，在大鼠自发性高血压模型中，Mfn-2的表达下降与高血压发病紧密相关。虽然VSMC的活化增殖是移植物慢性排斥反应中发生动脉硬化的重要基础细胞，但Mfn-2与其关系，在移植物慢性排斥反应中知之甚少。. 我们的实验结果中，首先成功建立大鼠腹主动脉移植和心脏移植模型。提取已发生移植物慢性排斥反应的腹主动脉VSMC，利用细胞免疫组化技术证实，相较于正常大鼠的腹主动脉VSMC，血小板生长因子受体β显著高表达已发生移植物慢性排斥反应的腹主动脉VSMC的细胞膜表面。Western blot和CCK-8法证实，血小板生长因子-BB（PDGF-BB）是维持发生移植物慢性排斥反应的腹主动脉VSMC活性的重要因子。并且，过表达大鼠Mfn-2，能够通过抑制PI3K-AKT-FoxM1信号通路，显著减轻PDGF-BB所刺激VSMC的增殖、胶原蛋白合成以及VSMC的细胞迁移。更重要的是，我们证明了在大鼠腹主动脉移植和心脏移植模型中，过表达大鼠Mfn-2，能够显著减轻移植物慢性排斥反应中的动脉硬化，同时，有效延长了心脏移植大鼠的生存时间。