CD40/CD40L信号通路调控良性前列腺增生症组织炎症发生与细胞增殖的作用机制研究

Many other studies and our study proved that estrogen could induce the proliferation of the benign prostatic hyperplasia (BPH), secretion of inflammatory factor and infiltration of lymphocyte, however, the exact mechanism was unclear. CD40/CD40L was an important immune signal pathway, it could promote the secretion of inflammatory factor and adherence factor and proliferation then induced the tissue inflammation and hyperplasia. CD40, CD40L and TRAF were found in prostate. Our former research found that normal prostate stromal cell could not found CD40L, the CD40L up-regulation significantly after intervention of estrogen. Therefore, we suspected that CD40/CD40L may be an important pathway in cell proliferation, secretion of inflammatory and adherence and infiltration of lymphocyte inducing by estrogen. In the present research item, we decided use multiply technique in molecular biology to prove that CD40/CD40L was an important pathway in prostate to induce the hyperplasia of prostate and infiltration of lymphocyte.

目前国内外研究及本课题组研究发现：雌激素可诱导前列腺增生症（BPH）细胞增殖、炎症因子表达、淋巴细胞浸润，但其具体信号通路并不明确。CD40/CD40L是重要的免疫学信号通路，可通过下游信号通路的激活诱导炎症发生与组织增生。目前已发现CD40/CD40L信号通路蛋白均表达于前列腺细胞。我们的前期研究发现正常前列腺基质细胞CD40表达量较低，雌激素干预后CD40L显著上调，上调CD40L后具有增强CD40/CD40L通路效应的作用。因此，课题组首次提出雌激素通过上调CD40L，过度激活CD40/CD40L信号通路，从而诱导前列腺细胞增殖、炎症因子释放及淋巴细胞浸润作用的假说。本项目拟通过多种分子生物学技术，证实CD40/CD40L信号通路是诱导前列腺中炎症因子表达、粘附因子释放、与细胞增殖的重要通路，并阐明该通路所介导的前列腺组织炎症发生、细胞增殖、淋巴细胞浸润的具体分子调控机制。

BPH是老年男性常见病，但其发病原因不明。既往研究发现炎症是造成BPH的重要原因之一，而CD40/CD40L是一条炎症反应的重要通路。本课题拟研究BPH中参与CD40/CD40L信号通路重要蛋白的表达规律，探讨BPH病理过程中CD40/CD40L在BPH细胞增殖与炎症因子释放过程中的作用, 从而为揭示BPH组织炎症的发生机制提供依据。.课题组收集66例因BP行BPH的手术标本，HE染色结果示：66例BPH标本中无炎症的BPH组织标本仅为4例（6.06%），伴有组织炎症的BPH标本为62例（93.94%）：轻度43例（65.15%）、中度14例（21.21%）、重度5例（7.58%）。ICH结果显示：伴有炎症的BPH组织中可见高表达CD40、CD40L、NF-kapaB; 而单纯BPH组织中低表达CD40、CD40L和 NF-kapaB。WB法结果显示：伴有炎症的BPH组织，其CD40、CD40L、NF-kapaB、TGF-beta、IL-1、MCP-1、Bax、Bcl-2的蛋白水平均高于单纯BPH组。.体外培养BPH-1和HPSMC细胞体系，体外培养BPH-1和HPSMC细胞体系：细胞免疫荧光法检测BPH-1及HPSMC中CD40、CD40L、NF-kapaB低表达。而加入CD40L分别刺激2种细胞后，细胞免疫荧光和WB法结果显示CD40、NF-kapaB表达量高于对照组。采用CCK8法，发现3ug/ml CD40L为实验最佳浓度。加入CD40L刺激培养的BPH-1和HPSMC细胞后，WB法显示IL-1、MCP-1、TGF-beta及应用RT-PCR法结果显示IL-6、IL－8、MCP-1、ICAM-1、VCAM-1的表达量均高于对照组,流式细胞仪结果显示：与对照组相比，加入CD40L刺激后的BPH-1和HPSMC细胞的细胞增殖率分别从34%和19%增加至46%和35%；而细胞凋亡率则分别从13.4%和7.8%降至0.3%和0.6%。WB检测结果示：加入CD40L共刺激后，BPH-1和HPSMC细胞中Bax表达量低于对照组，而Bcl-2表达量高于对照组。因此，我们认为CD40/CD40L信号通路是一条诱导BPH中炎性因子的表达、细胞增殖及粘附因子的释放的重要通路..