microRNA在Fas/FasL诱导的婴幼儿血管瘤内皮细胞凋亡中的作用

Infantile hemangiomas(IH) are the most common tumors of infancy. Even though the life cycle of hemangiomas is well documented, their origin and factors controlling the life cycle remain unclear.Recently,there is a great development in IH research,in which the effect of VEGF signal pathway in proliferations of endothelial cells and the apoptosis in endothelial cells had been proved. We have proved that the activity of Fas/FasL signaling pathways was enhanced obviously at the late period of proliferation and the early period of involution,meanwhile the apoptosis of endothelial cells was closely related to Fas/FasL signaling pathway.we all know that miRNA could adjust the process of apoptosis through Fas/FasL signaling. Therefore,our study want to identify the miRNAs which close related to the activity of Fas/FasL signaling through miRNA chip.Make sure the effect of these miRNAs on the apoptosis of endothelial cells induced by Fas/FasL. Ascertain whether the miRNA could be an hematology index which can anticipate the involution of IH.With this study we can ascertain the effect of miRNA in hemangioma as well as providing the theoretical basis for anticipate the evolution course of IH.

婴幼儿血管瘤(IH)是婴幼儿最常见肿瘤，虽然多数IH瘤体存在自发消退特性，但对其起源和病程影响因素了解甚少。研究显示大部分IH瘤体自发消退的特性和血管瘤内皮细胞的凋亡相关。我们早期研究发现IH增殖晚期和消退早期Fas/FasL信号通路活性明显增强，IH内皮细胞的凋亡和Fas/FasL信号通路密切相关。而miRNA可通过Fas/FasL信号通路影响凋亡过程。本研究拟通过miRNA芯片分析婴幼儿血管瘤各期miRNA表达谱变化，并与Fas/FasL信号通路活性作相关性分析确定相关miRNA为研究对象，在确定特定miRNA在IH中对Fas/FasL诱导的内皮细胞凋亡中作用的基础上，进一步研究各期IH血液中miRNA变化情况，并探讨其能否成为临床预判IH消退的血液学指标。这些特定miRNA的研究能够证实其在IH发病机制及病程演变中的重要作用，同时能够为临床判断IH病程变化提供理论依据。

项目背景：婴幼儿血管瘤危害巨大，具有独特的自发消退特性，机制不明，特别是miRNAs在其中的作用仍然不明确，对这种病程发展机制的研究有助于为疾病治疗提供理论基础。主要研究内容：本课题组检测了在婴幼儿血管瘤不同病程时期瘤体标本内具有差异表达的miRNAs，研究了婴幼儿血管瘤来源内皮细胞的分离和培养方法，分析了这些差异miRNAs对这些内皮细胞的功能影响和靶蛋白的预测，检测了普萘洛尔对这些细胞内miR-206表达的影响，并进一步通过表达谱芯片和双荧光素酶报告基因，深入探索了miR-206对婴幼儿血管瘤来源内皮细胞功能影响的靶蛋白。重要结果：通过本课题组的实验研究发现婴幼儿血管瘤病程发展中，miR-206、miR-455和miR-29a具有明显的差异表达。以不同方法进行了婴幼儿血管瘤内皮细胞的分离，并进行了传代培养和后续实验研究。实验发现miR-455对婴幼儿血管瘤内皮细胞的增殖具有明显的抑制作用，miR-29a对婴幼儿血管瘤内皮细胞的凋亡具有明显的促进作用，而miR-206对婴幼儿血管瘤内皮细胞的增殖、侵袭能力具有明显的抑制作用，对细胞的凋亡具有明显的促进作用。不同时期婴幼儿血管瘤血液标本的检测发现，miR-206在不同病程时期患儿外周血血浆中的表达变化不明显。一定浓度范围内的普萘洛尔，对HemECs内miR-206的表达呈剂量依赖性促进表达作用。miR-29a、miR-455、miR-206的表达对Fas/Fasl蛋白的表达没有明显的抑制作用。针对miRNA-206进行过表达慢病毒的设计，以相关慢病毒感染HemECs后进行mRNA表达谱芯片检测并结合数据库进行了数据分析，进一步realtime PCR实验发现miR-206对NOTCH3、TAGLN2 、E2F5具有明显的抑制作用，但对NRP1抑制作用不明显，蛋白印迹实验发现miR-206对E2F5转录因子抑制作用最明显，随后双荧光素酶报告基因检测发现相比较于对照组，miR-206能够明显抑制E2F5的基因表达，但这种抑制作用不超过20%。