Fas/FasL系统凋亡因子FADD在牛卵泡发育中的作用机制研究

牛卵泡发育和闭锁受多种信号分子及通路调控。Fas/FasL系统是近年来新发现的调控卵泡发育和闭锁的重要信号转导通路，FADD作为信号通路的接头蛋白，在此通路中起关键作用。本研究拟以牛卵泡颗粒细胞及成熟卵泡、闭锁卵泡为研究材料，采用实时定量PCR和蛋白质组学技术手段阐明FADD在牛成熟卵泡和闭锁卵泡中的表达规律；在此基础上，利用RNA干扰及基因免疫技术分别阻断和激活Fas/FasL通路，通过Annexin V-FITC染色、电镜扫描和细胞流式分析卵泡颗粒细胞的凋亡情况；同时利用ELISA检测FADD在活体中的免疫原性及生殖激素水平的变化，初步探索FADD在体内和体外对卵泡颗粒细胞增殖和凋亡的调控作用机制，为进一步揭示FADD等凋亡因子调控牛卵泡发育的机理开辟一条新的途径，同时也为开发提高母牛繁殖效率的DNA疫苗奠定分子生物学基础。

Fas/FasL系统是近年来新发现的调控卵泡发育和闭锁的重要信号转导通路，FADD和FasL作为信号通路中的重要调控蛋白，在此通路中起关键作用。本研究在国家青年科学基金项目的资助下针对FADD、FasL在体内和体外对卵泡颗粒细胞增殖和凋亡的调控作用机制进行了系统研究，对于进一步了解FADD、FasL等凋亡因子调控牛卵泡发育的机理提供了新的思路。通过为期三年的研究，完成了FADD基因功能结构域的生物信息学分析，研究了FADD基因在母牛不同组织器官中的表达谱、揭示了FADD在青年母牛和成年母牛成熟和闭锁卵泡颗粒细胞中的表达规律，在此基础上完成了干扰载体pSuper-FADD-shRNA和高表达载体pAcGFP-FADD的构建及体外转染实验，揭示了FADD过表达及被干扰后对牛卵泡颗粒细胞的增殖调控作用。同时构建了FADD起始诱导因子FasL免疫载体进行了小鼠和母牛活体免疫实验，在体内研究了FasL二次加强免疫后后对雌性动物发情、排卵等繁殖性能的作用。项目完成了预期研究的主要技术和经济指标，课题研究过程中发表研究论文11篇，其中SCI论文7篇，获得吉林省自然科学学术成果奖二等奖一项，申报国家发明专利1项，组织承办中国畜牧兽医学会畜禽遗传标记学分会学术研讨会一次，副主编和参编专著2部，培养和协助培养博士研究生1名，硕士研究生3名。