经典Wnt信号通路在再生障碍性贫血发病中的作用及穿龙薯蓣皂苷的干预机制

新近《自然》刊载研究者证实骨髓间充质干细胞（BMMSCs）为造血干细胞创造了支持性骨髓生态位。而经典Wnt信号通路在各种自身免疫疾病发生发展中起重要作用。在前期国家自然科学基金资助基础上，本研究以再障模型小鼠为载体，采用FCM、基因芯片、western blot等技术检测再障小鼠骨髓单个核细胞、BMMSCs中Wnt/β- Catenin信号家族中相关基因及蛋白表达、CD28/mTOR /S6、脂肪因子瘦素、脂联素、过氧化物体增殖剂活化受体家族( PPARs)、CAAT/增强子结合蛋白家族(C/EBPs)表达，线性分析指标之间的关系。以经典Wnt通路为切入点，探讨其在再生障碍性贫血发病中作用，探寻再障治疗靶标，以及从T细胞活化、造血干细胞分化及骨髓间充质干细胞成脂化过程中解析穿龙薯蓣皂苷的干预机制。进一步阐明穿龙薯蓣皂苷是否阻抑此通路，发挥免疫调节，恢复造血重建，为其治疗再障提供科学依据。

项目围绕穿龙薯蓣皂苷调节再生障碍性贫血的免疫应答，以骨髓间充质干细胞微环境改变与调节性T细胞免疫作用之间的互动为切入点，进行了以下研究：（1）穿龙薯蓣皂苷分离、提取、鉴定。（2）穿龙薯蓣皂苷对再障小鼠效应学研究。（3）穿龙薯蓣皂苷对再障小鼠T细胞的免疫调节作用。（4）穿龙薯蓣皂苷对骨髓间充质干细胞分化及成脂化的调控与机制探讨。结果显示：穿龙薯蓣皂苷能降低再障小鼠骨髓CD28+的表达、提高CD152+的表达，阻抑B7-CD28/CD152共刺激信号通路，进而抑制再障小鼠T细胞的活化与增殖；表明穿龙薯蓣皂苷具有阻抑 B7/CD28 通路，对再障小鼠T细胞活化、增殖和凋亡进行影响，发挥免疫抑制，调节免疫应答的作用。穿龙薯蓣单体能够显著升高Wntl、Wnt3a、Wnt10b、蛋白水平，降低负性调控蛋白Axin、TCF4的表达，增加β-Catenin的积累，并能抑制脂肪细胞形成的关键分子PPARγ以及C/EBPα蛋白的表达。从而起到调控骨髓内环境、修复骨髓造血功能、促进造血细胞恢复、改善再障小鼠血象和生存状况的作用。