miR-518b靶向Egr-1调控胚胎早期发育机制的研究

Half of the causes of miscarriage are remain not clear. Early embryogenesis is an issue which gets a lot of attentionis in the field of reproductive these days.In our previous studies we found that embryo damage is related to proangiogenic factors VEG and its soluble receptor-1(SFlt-1) ,and also related to miR-518b which monitor the growing of vessels. Our further studies found that Egr-1 is a target gene of miR-518b. Therefore, we speculate that miR-518b/Egr-1/VEGF may regulates the development of embryo. In order to prove this point, it will be necessary to confirm the relevance between miR-518b/ Egr-1 and early embryogenesis. Then, it will be focused on verification of the role of the miR-518b and it’s target gene Egr-1 in early embryogenesis, especially the role of angiogenesis ability, in vivo and vitro with hypoxia. This studie tend to clarify the mechanism of how miR-518b and its target gene Egr-1 regulate the early embryogenesis. Therefore, the project might have theoretical significance and important implications for leading to potential therapeutic targets for the prevention of embryo damage.

临床上有近50%的自然流产病因不明,胚胎停育一直是生殖领域的研究热点。我们前期研究首次发现胚胎停育与滋养细胞中VEGF、可溶性受体 sFlt-1及调控血管生成的miR-518b有关,并证实Egr-1为miR-518b靶基因。根据这一发现及最新的研究成果,我们推测：miR-518b/Egr-1/VEGF信号通路参与孕早期胚胎发育调控,因此,本课题拟先在临床证实miR-518b在孕早期胚胎发育中的预测作用;然后构建妊娠缺氧大鼠模型,从动物实验验证miR-158b及Egr-1对孕早期绒毛血管增生的影响；再通过体外细胞实验，探讨缺氧状态下miR-518b的功能及对胚胎发育调控作用，通过上调和下调靶基因Egr-1，探讨miR-518b调控胚胎发育的路径。本课题从临床研究、动物实验和细胞实验逐步深入阐明miR-518b靶向Egr-1调控胚胎早期发育的机制，为防治胚胎停育提供理论依据及新的药物靶点。

我们进行miR-518b靶向Egr-1调控胚胎早期发育机制研究。我们首先比较了早期胚胎停育患者和正常早期妊娠妇女绒毛组织的转录组测序结果和microRNA谱。发现在早期胚胎停育患者的绒毛组织中，miR-518b异常高表达，双荧光素酶报告试验证实EGR1为miR-518b靶基因，且EGR1在早期胚胎停育绒毛组织中异常低表达。早期胚胎停育绒毛组织中miR-518b的表达升高且EGR1的表达减少。细胞功能试验发现，miR-518b靶向EGR1抑制HTR8/SVneo细胞迁移和血管生成能力。在比较单独沉默EGR1、血管内皮生长因子（VEGF）及同时沉默EGR1/VEGF后，我们发现EGR1可通过降低VEGF的表达来抑制HTR-8 svneo细胞的迁移和血管生成能力。在HTR-8 svneo细胞中过表达缺乏miR-518b结合位点的EGR1，结果提示过表达EGR1拯救了外源性表达miR-518b的HTR8/SVneo细胞中的VEGF表达及迁移和血管生成能力。 .通过建立HTR-8/SVneo细胞系缺氧模型及动物缺氧模型，我们发现缺氧会降低miR-518b的表达，并增加EGR1和VEGF的表达，从而促进HTR-8/SVneo细胞的迁移和血管生成能力。miR-518b/EGR1/VEGF参与HTR8/SVneo细胞迁移和血管生成能力的缺氧调控过程。我们的研究结果为miR-518b在早期胚胎停育中的作用提供新的见解，为靶向治疗提供理论基础。. 本项目获得广西科技进步二等奖一项，广西医药卫生适宜技术推广奖一等奖一项 。国内外发表文章9篇,申报国家发明专利3项，在这基础上，申报并获得了国家自然科学基金1项，广西自然科学基金2项，培养博士研究生2位，硕士研究生5位。