NACK调控Notch转录起始复合物在胰腺导管上皮腺癌中作用的研究

The Notch signaling pathway plays an important role by governing many distinct cellular processes in tumorigenesis and development. Our preliminary study indicate that tyrosine protein kinase NACK is involed in Notch pathway activation by associating with the Notch transcriptional activation complex. Meanwhile, we found that there were consistent high expression of both NACK and Notch in nucleus of pancreatic cancer cells. Down-regulation of NACK will inhibit Notch target gene expression and proliferation of pancreatic cancer cells. Here we propose the hypothesis that NACK drives biological behaviour of pancreatic cancer by its regulating activity of Notch transcriptional activation complex. To reveal relationship between NACK and Notch as well as role of NACK in proliferation and invasion of pancreatic cancer, we will investgate changes of Notch pathway activity and biological hehaviour in pancreatic cancer cell by changing NACK expression, and Co-IP and CHIP will be used to comfirm relationship and interaction between NACK and Notch transcriptional activation complex. In addition, correlation analysis will be performed to quantify the strength of associaton between NACK and clinical outcome. Thus, we are hopeful that our research will make a better understanding of both Notch and pancreatic cancer and lead to new and improved therapeutic target for this disease.

Notch通路是肿瘤发生发展过程中的重要通路，我们的前期研究显示新的蛋白NACK参与了Notch通路活化，且此作用与Notch转录起始复合物的功能密切相关；同时,NACK和Notch在胰腺癌细胞核中一致高表达，而抑制NACK则会导致Notch通路靶基因表达下降，胰腺癌细胞增殖和侵袭能力降低。因此，我们认为NACK很可能通过调控Notch转录起始复合物影响胰腺癌的系列生物学行为。为深入探索NACK在Notch通路中的作用及其影响胰腺癌增殖侵袭的机制，本研究拟通过改变NACK表达水平了解其对胰腺癌细胞Notch通路及多种生物学行为的影响，借助Co-IP和CHIP等方法验证NACK与Notch转录起始复合物之间的相互作用，在此基础上进行临床胰腺癌标本中NACK表达情况和转移、预后的关联分析，进而明确NACK在胰腺癌侵袭、转移等过程中的作用、意义及相关机制。

shengwuxushengwu研究背景与目的.胰腺导管上皮腺癌（Pancreatic Ductal Adenocarcinoma，PDAC）占胰腺恶性肿瘤的90%左右，是造成肿瘤致死的主要病种之一。作为恶性程度非常高的肿瘤之一，多个胚胎干性通路包括Notch在绝大多数PDAC中都存在不同程度的激活，大量研究也证实了抑制干性通路对胰腺癌细胞的影响，并进行了相关的靶向干预研究。.我们在前期研究中从Notch转录起始复合物中分离出新的蛋白质D8Ertd82e，由于此蛋白对Notch 转录起始复合物的功能具有重要贡献，且蛋白质结构预测其C端具有蛋白激酶结构域，因此我们将其初步命名为NACK（Notch ActivationComplex Kinase）。其后的研究发现NACK是一个胚胎发育必须蛋白，NACK敲除具有胚胎致死效应，因此我们推测NACK对干性通路活化的肿瘤细胞具有一定的生物学作用。.因此，我们设计了本研究以探索NACK在胰腺癌中的分布情况、构建NACK shRNA的表达质粒研究NACK对胰腺癌细胞的生物学作用，利用动物体内成瘤实验验证NACK knock-down的在体影响，进一步对大样本临床胰腺癌组织进行NACK表达情况和预后的关联分析。.结果.1、NACK在胰腺癌细胞核和细胞浆中均有表达，多数胰腺癌的肿瘤组织中NACK表达显著高于癌旁组织；.2、构建的NACK shRNA质粒能够成功转染胰腺癌细胞，并从转录水平降低其NACK表达；.3、体外细胞学实验证实NACK knock-down能够显著抑制胰腺癌细胞的增殖和侵袭；体内动物实验证明了NACK下调的胰腺癌细胞裸鼠成瘤能力明显减弱；.4、NACK高表达的胰腺癌患者相对低表达组预后明显较差，NACK是预测胰腺癌预后的独立预测因子。.5、NACK经由Notch通路在胰腺癌发生发展中作用目前并无直接证据，可能的通路是AF4和ARID。.结论.NACK对胰腺癌的发生发展具有重要的作用，其功能缺失会显著影响胰腺癌的发展，是一个高效的潜在治疗靶点。同时，NACK在胰腺癌中并非通过Notch作用，其可能的作用通路为AF4和ARID。