核因子NF-κB在外源性吗啡影响胃癌进展中的作用

外源性吗啡是阿片类止痛药的代表性药物，在晚期癌痛病人中应用广泛，但它对于癌症进展的影响还不清楚。我们前期的研究发现，0.01 μmol/L-1 mmol/L吗啡抑制胃癌的生长增殖、促进胃癌细胞的凋亡，降低NF-κB表达。本项目以胃癌为例，针对NF-κB参与吗啡影响癌症进展的特点：①酵母双杂交法筛查与NF-κB相互作用的蛋白，以免疫共沉淀和激光共聚焦验证；②体外培养胃癌细胞，通过定量PCR、Western blot、激光共聚焦等观察吗啡对NF-κB相关分子、癌症相关基因表达及胃癌细胞功能的影响；③建立裸鼠胃癌移植瘤模型，定量PCR、Western blot、免疫电镜等检测NF-κB相关基因的变化，Tunel法和透射电镜观察胃癌细胞等的的结构变化；④观察应用吗啡等药物治疗癌痛的胃癌病人的存活率、复发及转移情况，应用Western blot和ELISA技术检测血中NF-κB及相关分子的表达。

外源性吗啡是阿片类止痛药的代表性药物，在晚期癌痛病人中应用广泛，但是吗啡是抑制肿瘤进展还是促进肿瘤进展，现今报道不一。本项目构建了人正常胃粘膜细胞cDNA文库，并用酵母双杂交法筛查了9个NF-κB相互作用的蛋白；体外细胞学实验中，通过培养胃癌MGC-803细胞，应用MTT法、克隆形成实验、流式细胞仪、划痕实验、透射电镜、RT-PCR以及Western blot等方法发现吗啡抑制胃癌细胞的生长增殖、促进胃癌细胞的凋亡，其机制可能与抑制NF-κB和survivin的表达、增强PTEN和Caspase-9的表达有关；体内动物实验中，我们建立了裸鼠人胃癌皮下瘤动物模型，应用TUNEL法、透射电镜、免疫组化、RT-PCR以及Western blot等技术观察到吗啡抑制裸鼠人胃癌皮下瘤的生长、促进肿瘤细胞凋亡、破坏肿瘤细胞的结构，NF-κB、Bcl-2、Cyclin D1和VEGF的表达降低，Bax的表达增加；临床研究中，我们收集了1144例肿瘤患者的病历资料，发现是否接受过相关治疗（手术治疗、化疗或放疗）、出现疼痛的时间、疼痛治疗史等是肿瘤患者预后的独立影响因素。总之，本研究初步揭示了吗啡抑制胃癌进展的分子机制，从而为吗啡在癌痛治疗中的应用提供指导。