滤泡辅助型T细胞分化增强对支气管哮喘中B细胞分泌功能及气道炎症的影响

The secretion of immunoglobulin (Ig) by B lymphocytes with the assistance of T lymphocytes is one of the central parts of anaphylaxis in asthma. Evidence suggested that T follicular helper cells (Tfh cells) were the major cell type that was involved in the differentiation, proliferation and activation of B cells. The enhancement of main cytokine (IL-21) and main surface marker (CXCR5) of Tfh cells have been proved in asthma.However, the role of Tfh cells in asthma is unexplored yet. Our preliminary experiment found that the expression of CXCR5 and the main transcription factor BCL-6 mRNA were increased in asthma patients, that represented the increased differentiation of Tfh cells, and we also observed the decreased express of BCL-6 mRNA and the decreased differentiation of Tfh cells after treatment with glucocorticoids. Therefore, we supposed that the increased infrequency of Tfh cells may promoted the differentiation and Ig secretion of B cells and the airway inflammation in asthma. In this project, we will detect the correlativity between the differentiation of Tfh cells and the secretion of Ig of B cells, the severity of the disease in asthma patients at first. Second, we will detect the influence of IL-21 antibodies injection to the differentiation and secretion (IgE and IgG1) of B cells, and the airway inflammation and reaction in mouse model of asthma. This project may provide a new clue to the mechanism of asthma.

B细胞分泌免疫球蛋白（Ig）是哮喘过敏反应的核心机制之一，这一过程需要T细胞辅助。研究表明滤泡辅助型T细胞（Tfh细胞）是B细胞分化、增殖及活化的主要辅助型T细胞。在哮喘中已检测到Tfh细胞主要细胞因子IL-21及主要表面分子CXCR5的上调，但Tfh细胞是否参与了哮喘的发病机制尚不清楚。我们的预实验发现，哮喘患者体内Tfh细胞存在分化增强，表现为CXCR5及主要转录因子BCL-6mRNA表达上调，而经激素治疗后Tfh分化明显下调。根据上述结果我们推测，在哮喘中Tfh细胞分化增强可能促进B细胞的分化及Ig分泌，并最终导致气道炎症的形成和发展。本项目首先观察哮喘患者体内Tfh分化水平与B细胞分泌Ig和哮喘严重程度的相关性，其次在哮喘小鼠模型上观察注射IL-21抗体对B细胞分化及分泌IgE、IgG1和对气道炎症、气道反应性的影响，可能为哮喘的发病机制提供新的思路。

本项目计划首先观察哮喘患者体内Tfh分化水平与B细胞分泌Ig和哮喘严重程度的相关性,其次在哮喘小鼠模型上观察注射IL-2、BCL-6慢病毒干扰RNA对B细胞分化及分泌IgE、IgG1和对气道炎症、气道反应性的影响。.本项目主要研究内容分两部分进行。首先，我们观察了Tfh 细胞在哮喘患者中的分化、分泌细胞因子水平；对 B细胞分化及功能的影响；与气道炎症、气道高反应性、疾病严重程度及治疗效果的相关性分析。其次，我们观察了在哮喘的鼠模型中，抑制BCL-6mRNA表达对哮喘鼠模型中 Tfh 细胞的分化、分泌细胞因子水平、B 细胞分泌功能及对气道炎症、气道高反应性的影响。.我们发现，急性发作期哮喘患者Tfh的表面分子标志表达、其转录基因BCL-6、主要分泌细胞因子IL-21的表达较健康对照组升高，而治疗后显著降低；哮喘患者血清IL-21水平与患者肺功能指标FEV1 /FVC、FEV1 /Pre 呈显著负相关；哮喘患者急性发作期外周血血浆中IL-21、IgE、IgG1水平均显著高于健康对照组；Tfh细胞表达比例与B细胞比例及IgE分泌水平在哮喘患者急性发作期呈正相关关系，但与IgG1比例之间没有显著相关性。IL-21的表达与B细胞比例及IgE分泌水平亦呈正相关关系，但与IgG1比例之间没有显著相关性。.在哮喘属模型中，我们发现，哮喘小鼠的Tfh细胞比例较对照组增加，而BCL-6慢病毒干扰或地塞米松治疗后Tfh细胞在肺泡灌洗液中的比例明显降低，在脾脏、淋巴结及外周血存在相同趋势。同时，BCL-6慢病毒干扰组哮喘小鼠气道阻力较哮喘组降低，而肺顺应性增加。哮喘组血清及肺泡灌洗液中IgE水平上升，BCL-6慢病毒干扰后IgE水平降低，但IgG无此趋势。.人体及动物试验结果均提示Tfh细胞参与了哮喘的发病过程，Tfh细胞在哮喘中分化增加，并通过其对B细胞分泌IgE水平的影响参与哮喘的炎症反应，并与患者发病表现密切相关。抑制Tfh细胞主要转录基因BCL-6的表达，可以抑制哮喘的炎症反应及气道高反应性，减少B细胞分泌IgE。故本课题研究结果证明了Tfh细胞在哮喘炎症反应中的重要作用，为哮喘新的发病机制及治疗提供新的靶点。