多位点基因重组构建高效稳定青蒿酸酵母工程菌的研究

外源基因在微生物中的优化重组是代谢工程的核心技术，外源基因在宿主中的稳定性是瓶颈因素之一。本项目拟将重要抗疟药青蒿素前体青蒿酸生物合成所必需的5个基因导入酿酒酵母，在酵母中重构了一条青蒿酸代谢途径。拟探索两种不同的基因组合方式对青蒿酸酵母工程菌制备青蒿酸的影响。一种方式是将青蒿酸生物合成所必需的基因以成簇的形式定向整合到酿酒酵母染色体的同一位点上。另一种方式是将这些基因通过多位基因重组定向整合到酵母染色体上。此外，本项目还将重点探索紫穗槐-4，11-二烯羟基化P450酶及P450还原酶基因的二种组合方式和三种分子改造方式对青蒿酸制备的影响。这些机制的研究为获得高效稳定的青蒿酸酵母工程菌，从而为将来大规模发酵生产青蒿素提供关键技术及基础数据，同时也促进了代谢工程生物制药新工艺的发展。