13C标记LA对贵州黑山羊瘤胃CLA合成影响的生物机制研究

Numerous studies have demonstrated that CLA is helpful on human health.CLA is derived from the ruminant products, its butyrivibrio fibrisolvens to biohydrogenate LA into CAL. The applicant have demonstrated in the dissertation that a high LA ration improves CLA in rumen,serum,and meat in goats significantly, therefore, the first hypothesis about LA coating or get into a butyrivibrio fibrisolvens cell,result in changing of the cell metabolism,and also integrality, and will affects activity of LA heterogeneous enzymes,and will affects CLA content in the rumen is raised. Secondly, we propose LA affects the amount of butyribibrio fibrisolvens,result in changing of actibity of LA heterogeneous enzymes,and will affects CLA content in the rumen.The study will be carry out in Guizhou black goats that has good meat quality, some advanced techniques, such as isotope tracer technique, electron microscope scanning perspective technique, solid-state nuclear magnetic and the techniques for cell biology will be used to confirm the proposed mechanism in the study. The relusts of the study will provide a theoretical model for development high CLA meat using a diet nutrition regulation method in Guizhou black goats.

大量研究证明，CLA对人体健康有诸多益处。CLA主要来源于反刍动物产品，反刍动物瘤胃溶纤维丁酸弧菌是合成CLA的主要菌株。本项目在申报人博士论文已经证明高LA日粮能显著提高山羊瘤胃、血清和肌肉中CLA含量的基础上，首先假设LA通过覆盖或进入瘤胃溶纤维丁酸弧菌细胞，从而导致其细胞代谢、细胞完整性及亚显微结构发生变化，影响其LA异构酶分泌能力，进而影响瘤胃CLA合成；其次假设LA通过影响瘤胃溶纤维丁酸弧菌数量来改变LA异构酶浓度，进而影响瘤胃CLA合成。项目以肉质优良的贵州黑山羊作为试验动物，将同位素示踪技术、扫描透视电镜技术、固体核磁１３Ｃ ＮＭＲ以及现代细胞生物学技术等先进技术与经典动物营养研究方法有机结合，从细胞生物学水平系统研究LA对山羊瘤胃CLA合成的影响机制，从而论证项目提出的假设，为通过日粮营养调控途径开发高CLA贵州黑山羊肉产品提供理论支撑。

本研究以贵州黑山羊作为研究对象，围绕瘤胃灌注LA对贵州黑山羊瘤胃CLA、TVA、溶纤维丁酸弧菌数量、亚油酸异构酶浓度影响、贵州黑山羊瘤胃溶纤维丁酸弧菌分离鉴定等5个研究内容，整合完成了瘤胃灌注LA对贵州黑山羊瘤胃CLA、TVA、溶纤维丁酸弧菌数量、亚油酸异构酶浓度影响研究；贵州黑山羊瘤胃溶纤维丁酸弧菌分离鉴定；13C标记LA 对贵州黑山羊瘤胃溶纤维丁酸弧菌表面形貌及亚显微结构影响研究；13C标记LA对贵州黑山羊瘤胃溶纤维丁酸弧菌细胞代谢的影响4个系统化试验，试验结果结论如下：.试验一结果和结论：.贵州黑山羊瘤胃灌注LA显著提高CLA前体物反-11十八碳烯酸含量，也显著提高CLA合成主要细菌溶纤维丁酸弧菌的数量，从而显著的提高亚油酸异构酶浓度，从而显著提高瘤胃CLA含量。.试验二结果结论：.本试验成功分离出一株Butyrivibrio菌属的Butyrivibrio fibrisolvens菌，其16S rRNA GenBank登录号分别为X89971.1。.试验三结果结论：.培养基中添加13C标记LA对本研究分离鉴定的溶纤维丁酸弧菌细菌的表面形态和细胞器数量都具有明显的影响，随着亚油酸的添加量的增加，细菌发生扭曲、变形，甚至裂解，线粒体等细胞器的数量也逐渐减少，初步证明LA通过覆盖于溶纤维丁酸弧菌细菌的表面导致细胞形态的改变，进而影响细胞的生长和代谢。.试验四结果结论：.培养基中添加LA提高C10∶0、C11∶0、C12∶0、C17∶0、C20∶0、C21∶0和C23∶0饱和脂肪酸含量及C18∶2(n-6)、C18∶3(n-3)多不饱和含量，降低C15∶1、C16∶1、C17∶1、C18∶1(n-9)单不饱和脂肪酸含量，添加LA对溶纤维丁酸弧菌CMP、AMP、GMP3种核苷酸合成量无显著影响。初步证明了LA主要影响贵州黑山羊瘤胃溶纤维丁酸弧菌细菌的脂肪酸代谢，对其遗传物质无显著影响。.项目的研究结果为将贵州黑山羊打造成为高CAL产品提供了一定的理论支撑，对做大做强贵州黑山羊养殖业具有积极的意义。