茶多酚对微卫星不稳定结直肠癌的Notch信号转导系统的影响及其机理研究

结直肠癌可分为微卫星不稳定（MSI）结直肠癌和染色体不稳定（CIN）结直肠癌;我们在前一个自然科学基金的资助下，研究了"抗突变中药"对MSI结直肠癌的作用，发现茶多酚可以抑制Notch信号转导途径基因HES1和JAG1的表达;本课题首先建立结肠皮下易位结肠癌荧光原位移植模型，该模型是一个完全创新动物模型，是结肠癌原位移植模型的新突破；利用该模型研究茶多酚在肿瘤和器官中分布和肿瘤对茶多酚反应，并检测HES1、JAG1等Notch信号转导基因的变化，确定茶多酚在在体研究中是否可以抑制这些基因变化；建立HES1高表达质粒及使用HES1 snRNA 转染Lovo细胞细胞株，正面论述、反面验证茶多酚对该基因的影响，阐明茶多酚是否对Notch信号转导途径具有双向调节作用。这一研究成果将阐明茶多酚抑制MSI结直肠癌的机理，是MSI结直肠癌治疗研究的新突破，对进一步探索在干细胞水平进行治疗研究提供新思路。

结直肠癌可分为微卫星不稳定（MSI）结直肠癌和染色体不稳定（CIN）结直肠癌;本课题在体外研究中发现茶多酚可以抑制结直肠癌细胞的增殖，其发挥作用具有时间依赖性和剂量依赖性；通过流失细胞仪检测发现茶多酚可以诱导细胞凋亡，并且能调节细胞周期变化。在此基础上，对茶多酚的有效成分做了进一步研究。.采用不同浓度的EGCG处理结肠癌细胞株和结肠癌原位移植模型，MTT法检测EGCG对结肠癌细胞增殖的抑制作用；用流式细胞仪和Tunnel法检测EGCG对结肠癌细胞细胞凋亡和细胞周期的影响；实时荧光定量PCR检测Notch1、Notch2、HES1、JAG1基因的表达情况；Western blot检测EGCG干预后的结肠癌细胞的Notch1、Notch2、HES1、JAG1蛋白的表达情况。结果发现 MTT法检测EGCG对4株细胞增殖的抑制作用均具有浓度依赖性和时间依赖性，流式细胞仪方法检测提示EGCG能增强4株结肠癌细胞的凋亡率，且剂量与细胞凋亡率呈正相关，而且能影响细胞周期达到抑制结直肠癌细胞增殖的作用；在体研究发现，应用5、10和20mg/kg EGCG的3个治疗组，第7天肿瘤有所缩小；在第14天，5和20mg/kg EGCG组与对照组即有统计学差异（P<0.05）；在第28天时应用EGCG的3个治疗组均与对照组有统计学差异（P<0.05），Tunnel法提示治疗组肿瘤细胞的凋亡明显高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）；RT-PCR和Western-Blot提示在各细胞株中, EGCG处理组的HES1和Notch2基因表达均远远低于对照组，差异有统计学意义（p＜0.05）；JAG1基因在SW480细胞中表达降低,差异有显著意义,(p=0.019),在HT-29和HCT-8细胞中有降低的趋势，而在LoVo细胞中有增高趋势,但是差异无统计学意义；Notch1基因在4个细胞株中均有上调趋势，但是仅在LoVo和SW480细胞差异有统计学意义（p＜0.05）。通过体外和体内研究发现，EGCG均有抑制结直肠癌肿瘤增殖的作用，而且还具有诱导细胞凋亡、影响细胞周期的作用，EGCG处理后的细胞株，其HES1和Notch2基因均出现了明显的抑制，提示EGCG可能通过抑制HES1和Notch2基因发挥抑制结直肠癌作用，Notch1和JAG基因尽管在EGCG处理的不同细胞株中出现了改变.