松果菊苷调节抗增殖蛋白PHB表达在帕金森病模型中的作用及机制研究

The main pathogenesis of Parkinson's disease is the apoptosis of dopaminergic neurons, and the effective inhibition or reduction of apoptosis is an important means for the realization of neuroprotection. Cistanche essence prescription is a tonifying kidney compound produced by our research group. It can improve the clinical symptoms of patients. The compound medicine of Herba Cistanche can activate PI3K/Akt pathway and alleviate neuronal apoptosis, but the specific mechanism is not clear yet. Prohibitin mainly localized in mitochondria, regulating participates in cell growth and differentiation, apoptosis, its overexpression has been shown to activate PI3K/Akt pathway and inhibit the apoptosis of nerve cells. This paper application of gene expression and interference technology, using Western blot, flow cytometry, immunohistochemistry and in vivo and in vitro studies on Parkinson's disease model, explore the effective monomer of Cistanche echinacoside is through the regulation of prohibitin effect of PI3K/Akt protein pathway, and thus reduce the apoptosis of nerve cells to exert neuroprotective effects, and provide experimental basis for prevention and treatment of Parkinson's disease of Chinese medicine for tonifying kidney.

帕金森病的主要发病机制是多巴胺能神经细胞凋亡，有效抑制或减少细胞凋亡是实现神经保护的重要手段。苁蓉精方是本课题组前期实验总结出来的补肾复方，能改善患者的临床症状；复方中的君药肉苁蓉能激活PI3K/Akt通路，减轻神经细胞凋亡，但具体机制尚不明确。抗增殖蛋白主要定位于线粒体，广泛参与细胞的生长、分化、凋亡的调节，其过表达已被证实能激活PI3K/Akt通路，抑制神经细胞凋亡。本课题拟应用基因过表达与干扰技术，采用Western blot、流式细胞术、免疫组化等方法，对帕金森病模型进行体内和体外研究，探讨肉苁蓉的有效单体松果菊苷是否通过调控抗增殖蛋白影响PI3K/Akt通路，进而减轻神经细胞凋亡来发挥神经保护作用，为补肾中药防治帕金森病提供一定的实验依据。

帕金森病的主要发病机制是多巴胺能神经细胞凋亡，有效抑制或减少细胞凋亡是实现神经保护的重要手段。课题组前期实验总结的补肾复方，以肉苁蓉为君药，能改善患者临床症状。松果菊苷是肉苁蓉的主要活性成分，具有抗氧化、抗凋亡作用。抗增殖蛋白PHB定位于线粒体，参与维持线粒体结构与功能，对细胞的生长、分化、凋亡的调节有重要作用。为探讨补肾复方治疗帕金森病的分子机制和治疗靶点，本课题应用基因干扰技术，采用Western blot、流式细胞术、免疫组化等方法，对帕金森病模型进行体内和体外研究，发现松果菊苷可以改善帕金森病模型大鼠一般情况与行为学，增加帕金森病模型大鼠黑质区TH阳性细胞数，增加帕金森病模型细胞存活率，提示松果菊苷对帕金森病模型具有保护作用。研究同时发现，松果菊苷可以降低帕金森病模型细胞凋亡率，减少帕金森病模型细胞中凋亡相关蛋白表达，提示松果菊苷对帕金森病神经细胞的保护作用是通过减轻细胞凋亡实现。研究还发现松果菊苷可以增加抗氧化酶表达，降低活性氧含量，升高线粒体膜电位，从而改善线粒体超微结构，提示松果菊苷通过保护线粒体功能来减轻细胞凋亡。进一步研究发现松果菊苷能增加帕金森病模型细胞中PHB的表达，增加AKT的磷酸化；敲减PHB减少了AKT的磷酸化，减弱了松果菊苷对细胞凋亡的保护作用，提示松果菊苷通过上调PHB水平，促进AKT磷酸化来保护神经细胞。本研究明确了PHB在松果菊苷保护神经细胞中的关键地位，揭示了中药肉苁蓉主要活性成分松果菊苷保护神经细胞的一个新的分子机制，即通过上调PHB，促进AKT磷酸化，进而改善线粒体功能，减轻神经细胞凋亡，来实现松果菊苷对神经细胞的保护｡本研究为研究补肾益髓复方治疗帕金森病的主要有效成分及分子机制提供了实验依据，完成了研究目标。