抗人C1抑制物基因工程抗体的研制及其构象与功能分析

以分泌抗人C1-INH McAb杂交瘤细胞总RNA为模板，经RT-PCR扩增出抗体的轻、重链可变区基因（VH和VL），由pUC18/19测序载体二端对基因片段进行序列测定。序列分析表明VH基因含333bp，编码111个氨基酸，属于小鼠IgVH基因的II（A）亚组，是由胚系VH-D-JHB基因重排产生；VL基因含303bp编码101个氨基酸，属于小鼠VLIV亚组，是由VK-JKl重排产生。用人工合成（Gly4Ser）3连接肽，以VH-Linker-VL形式连接成scFv，克隆入pIg20分泌型表达载体，在大肠杆菌中表达F7scFv和SPA融合蛋白，Westernblot和抗原结合实验表明具有结合活性。利用吴加金Goldkey软件对VH、VL和scFv推导的氨基酸顺序进行二级结构的预测，对可能的空间结构进行分析。表达蛋白经IgG亲和层析柱纯化，用凝血酶III去除SPA蛋白，对纯化的scFv进行圆二色性分析。