白蛋白纳米载体介导的端粒酶ASODN对肝癌常规介入治疗的增效研究

端粒酶的活化对肝癌的发生、发展及预后等有重要影响。采用端粒酶反义寡核苷酸（ASODN）降低端粒酶活性可以抑制肿瘤的生长，ASODN与肝癌栓塞化疗（TACE）相结合可以使ASODN更有靶向性，值得深入研究。目前我们已经成功制备了适合介入与端粒酶研究的大鼠种植型肝癌模型（Walker-256）并明确了瘤内直接注射端粒酶抑制剂可以控制肝肿瘤的生长。本课题拟完成：1.制备白蛋白纳米载体介导的端粒酶ASODN；2.采用肝动脉插管将ASODN与TACE相结合使其发挥靶向、稳定、长期的抑瘤作用；3.采用TRAP-ELISA及病理等方法从基因水平、超微水平、细胞水平及大体水平观察ASODN对肝恶性肿瘤的影响及其与瘤内及瘤周端粒酶活性改变的关系。通过上述研究，力图明确ASODN通过动脉途径对常规TACE的增效作用及机制，为端粒酶反义寡核苷酸与常规介入相结合这一可能转化应用于临床肝癌治疗的新方法提供实验依据。

原发性肝癌是我国常见病、高发病，经血管肝动脉化疗栓塞术（TACE）是肝癌常用的治疗方法，但存在肿瘤控制不彻底等不足。前期研究表明，将端粒酶作为靶点进行活性抑制能有效控制肝脏转移性WALKER-256肿瘤的生长。在此基础上，本研究探讨了将反义寡脱氧核苷酸（ASODN）联合TACE以增加肝脏肿瘤控制效果的可行性及其机理。.本研究采用微创技术建立SD大鼠肝脏Walker-256荷瘤模型；制备全硫代ASODN；联合ASODN及常规TACE（碘油+表阿霉素）处理肝WALKER-256肿瘤。设立对照组、TACE组（单纯TACE）、ASODN组（ASODN+TACE）等，在处理后第7、14天取材分析。采用TRAP-PCR-ELISA法检测肿瘤组织的端粒酶活性；免疫组化Envision法检测肿瘤组织PCNA、bcl-xl、bcl-2、Bax等基因表达；MG-P-MY染色法测量肿瘤细胞凋亡率；醋酸双氧铀及柠檬酸铅染色电镜下观测肿瘤细胞超微结构；影像学方法动态测量肿瘤生长情况。.结果显示：处理后第7及第14天ASODN组肿瘤组织端粒酶活性明显低于对照组及TACE组，分别为0.312±0.135、0.748±0.113、0.623±0.124（第7天）和0.298±0.103、0.737±0.136、0.695±0.111（第14天）；ASODN组肿瘤体积小于对照组及TACE组，分别为328.691±24.008mm3、767.125±42.139mm3、489.652±33.148mm3（第7天）及236.475±18.324mm3、897.034±66.198mm3、501.003±46.387mm3（第14天）；ASODN组肿瘤细胞调亡率明显升高、电镜下见调亡小体，HE染色显示ASODN组肿瘤组织各种类型坏死明显；ASODN组PCNA基因及bcl-2 基因阳性细胞表达率明显低于对照组及TACE组；bax基因阳性细胞表达率高于对照组及TACE组。.为进一步探索ASODN的抑瘤效果及机理，本研究增加了ASODN对WALKER-256细胞系体外抑瘤作用的机理探索并得到了与在体接近的发现。.研究初步结果表明，端粒酶抑制剂ASODN联合TACE能通过降低SD大鼠肝脏WALKER-256肿瘤端粒酶活性及对相关基因的调节，诱导肿瘤调亡、提高对肿瘤生长的抑制作用，值得进一步深入研究。