基于VEGF激活PI3K-Akt-mTOR信号通路探讨参苓白术散加味对大鼠骨癌痛的影响及其机制

Bone metastases pain is a common complication of tumor development to middle-late. Studies have shown that:（1）PI3K Akt - mTOR many aspects involved in the formation of bone cancer pain.(2)VEGF activated PI3K Akt - mTOR pathway, involved in the formation of bone cancer pain. . Early research has shown that:shenlingbaishusanjiawei can reduce the expression of VEGF, is very good to reduce lung cancer patients with bone metastases pain symptoms.IIts mechanism is the inhibition of VEGF, May further inhibition of PI3K - key target Akt - mTOR gene Akt, mTOR, S6, thus inhibiting the signal path. 75 wistar ratsWill be randomly divided into: cure group, model group, the solvent group, normal group, positive control group.To extend the lung cancer cells growing rat tibia bone marrow cavity make bone cancer pain model,4 set of building after 14 days before the dosing respectively，Before and after Building on a regular basis behavioral testing,Drug delivery, a week after the tumor size, pathological detection of cell morphology, rt-pcr, immunofluorescence, Westerin - blot test AKT, mTOR, S6, VEGF and its mRNA expression, flow cytometry instrument detecting apoptosis, explore its action mechanism.

骨癌痛是肿瘤发展到中晚期的常见并发症，研究表明（1）PI3K-Akt-mTOR参与了骨癌痛的形成。（2）VEGF激活PI3K-Akt-mTOR通路，参与了骨癌痛的形成。. 前期研究表明：参苓白术散加味降低VEGF表达，很好减轻肺癌骨转移患者疼痛症状。其机制是该方抑制VEGF，可能进一步抑制PI3K-Akt-mTOR关键靶基因AKT、mTOR、 S6,从而抑制该信号通路。75只wistar大鼠随机分为：治疗组、模型组、溶媒组，阳性对照组，正常组。将传代肺癌细胞种植大鼠胫骨骨髓腔制造骨癌痛模型,前4组造模后14天分别给药，造模前、后定期进行疼痛行为学测试、给药一周后取材，测肿瘤体积,病理检测细胞形态，RT-PCR、免疫荧光、Westerin-blot检测AKT、 mTOR、 S6、VEGF及其mRNA表达，流式细胞仪检测细胞凋亡，探讨其作用机制。

前期研究表明：参苓白术散加味降低VEGF表达，很好减轻肺癌骨转移患者疼痛症状。本研究以SC1250 IMR-32 肺癌细胞经过传代后制备大鼠肺癌骨转移模型，将105只大鼠随机分 7 组：参苓白术散加味煎剂高剂量组、中剂量组、低剂量组、模型组、溶媒组，正常组，雷帕霉素(Rapamycin)组，每组 15 只，按课题方案干预后进行组织取材，进行行疼痛行为学测试、测肿瘤体积,病理检测细胞形态，RT-PCR、免疫荧光、Westerin-blot检测AKT、&nbsp;mTOR、&nbsp;S6、VEGF及其mRNA表达，流式细胞仪检测细胞凋亡。结果显示：参苓白术散加味高剂量组、中剂量组、低剂量组模型小鼠胫骨组织中p-mTOR、Akt、P706S、VEGF基因表达显著下调，Western blot检测结果表明，参苓白术散加味中剂量组、低剂量组、雷帕霉素组模型小鼠胫骨组织p-mTOR、Akt、P706S、VEGF蛋白表达较生理盐水组显著下调，与生理盐水组比较具有显著统计学意义（P<0.01)；同时参苓白术散加味高剂量组模型小鼠胫骨组织p-mTOR、Akt、P706S、VEGF蛋白表达较生理盐水组也有一定程度下调，与生理盐水组比较具有统计学意义（P<0.05)。而模型组与生理盐水组比较无明显差异(P＞0.05)。结论：1.参苓白术散加味对骨转移癌痛模型小鼠具有明显的治疗作用，可以抑制肿瘤细胞的生长，并且不同程度促进肿瘤细胞的调亡。2.参苓白术散加味可以降低降低模型小鼠胫骨组织中p-mTOR、Akt、P706S、VEGF蛋白及基因的表达。3.参苓白术散加味可能通过下调VEGF的表达影响肿瘤血管生成，抑制PI3K-AKT-mTOR信号通路mTOR靶基因的表达，从而阻断骨转移癌痛的生物信号传导来发挥治疗作用的。