RELMβ参与2型糖尿病肾病早期发生机制及其预测价值研究

抵抗素样分子β（RELMβ）是抵抗素样分子家族成员之一，与细胞增殖、天然免疫等过程关联，但其在糖尿病肾病（DN）中的研究尚未见报道。课题前期工作显示2型DN患者血清RELMβ升高，且人群随访发现发生早期DN的患者在其尚无并发症阶段亦已出现血清RELMβ升高，故推测RELMβ可能参与DN的早期发生，并可能成为预测早期DN的分子指标。本课题拟利用肾脏各种固有细胞进行高糖高脂等状态下RELMβ表达定位分析，加入外源性RELMβ、过表达或沉默RELMβ表达后检测细胞形态和增殖凋亡等改变；利用DN动物模型证实RELMβ表达定位及RELMβ动态改变与肾脏损害的关系；利用2型糖尿病无并发症人群进行前瞻性研究，比较RELMβ升高与微量白蛋白尿及项目组建立的决策树模型诊断早期DN的时序关系。通过本研究证明RELMβ参与2型DN早期发生机制，血清RELMβ可作为预测DN的指标，为临床防治DN提供有力的工具。

本研究根据有无糖尿病及蛋白尿分为不同病例对照组。检测受试者血浆RELMβ及生化指标。构建DN大鼠模型，检测肾脏组织及细胞内RELMβ的表达。高糖高脂干预肾脏细胞，检测RELMβ蛋白的表达。不同浓度RELMβ蛋白干预肾脏细胞，检测细胞增殖。构建过表达及沉默RELMβ基因的稳转人肾脏细胞株，检测细胞增殖凋亡、细胞周期及MAPKs通路活性的改变。PCR array筛选RELMβ可能调控的肾细胞转导通路基因。结果提示 糖尿病微量白蛋白尿患者血浆RELMβ（201.68±27.77 pg/ml）较糖尿病无白蛋白尿患者（153.56±27.77 pg/ml）、非糖尿病无白蛋白尿者（142.90±4.12 pg/ml）及非糖尿病有白蛋白尿患者（141.41±8.85 pg/ml）明显增高，而糖尿病无白蛋白尿患者、非糖尿病无白蛋白尿者及非糖尿病有白蛋白尿患者间无明显差异。糖化血红蛋白、臀围、体脂含量、肾小球滤过率和收缩压是血浆RELMβ水平的独立影响因素。高血浆RELMβ水平患者出现糖尿病微量白蛋白尿的风险显著增加。RELMβ蛋白主要集中在糖尿病肾病大鼠的肾小球系膜区以及人肾小球系膜细胞（HMC）的胞浆内表达。高糖、高脂可呈时间依赖性刺激HMC分泌RELMβ蛋白。210ng/ml RELMβ蛋白可显著促进HMC增殖，而低浓度RELMβ蛋白对增殖没有明显影响。过表达RELMβ的HMC增殖显著增加，干扰RELMβ的HMC增殖显著抑制。过表达RELMβ可促进HMC由G0-G1向S期进展；干扰RELMβ可抑制HMC由G0-G1向S期发展。过表达RELMβ的HMC其p38和JNK MAPK的磷酸化活性增加，干扰RELMβ的HMC其p38和JNK MAPK的磷酸化活性下降，ERK1/2活性均没有明显影响。P38 MAPK通路抑制剂SB202190可以抑制由过表达RELMβ所引起的HMC的增殖。RELMβ基因对HMC凋亡无显著影响。信号转导通路发现者PCR Array芯片及RT-PCR验证结果提示RELMβ基因可致HMC出现若干上调及下调的基因。这些基因主要集中在Jak-Stat通路、Wnt通路和Survival通路。