ADE效应在重症登革发病机理中作用的研究

Dengue virus is the most prevalent arthropod-borne virus in humans, leads to grave social harm and causes dengue and serve dengue. Antibody-dependent enhancement (ADE) is the most important hypothesis of causing the severe dengue, but the pathogenesis of ADE has not been clarified for the lack of suitable animal model. However, some recent researches indicated that prM protein played a critical role of ADE ,which brought us a new notion for the applicable ADE animal models. Since we have prepared some ADE-related monoclonal antibodies and established some mice models of dengue fever, ADE antibody library will be generated by the use of bioinformatics and monoclonal antibody preparation technology. After injecting with some ADE-relatived antibodies, the A129 and C57BL/6 mice will be infected with a different serotype of dengue virus. The best ADE model will be chosen according to the symptoms of the mice, the incidence and the mortality, the viral load, the symptoms of vascular leakage, platelet count and the level of proinflammatory cytokines such as TNFα. After that, we will compare the differences among passive immunity of ADE antibody, active immunity of a different serotype and the infection with high titer of dengue virus which express Renilla luciferase stably by imaging technology of small animals，the pathogenesis and the main factors of severe dengue will be elucidated.

登革病毒是目前分布最广、感染人数最多、危害较大的一种虫媒病毒，可引起登革热和重症登革。ADE效应是引起重症登革的最重要假说，但机制尚未阐明，主要原因是缺乏适用的动物模型。近期在prM蛋白与ADE关系的研究进展为ADE动物模型研究提供了新思路。本项目拟在前期已获得部分ADE相关单克隆抗体和建立多种登革小鼠模型的基础上，利用生物信息学和单抗制备技术，优化ADE抗体库。对获得的抗体配对重组，注射于A129和C57BL/6小鼠后用异型登革病毒攻击，通过观察小鼠体征、统计发病率和死亡率、监测病毒载量、血管渗漏症状、血小板数量和TNFα等前炎症因子水平，筛选出最优效果的ADE模型。利用该模型，用稳定表达Renilla荧光素酶的重组登革病毒对免疫小鼠攻毒，结合小动物活体成像技术，比较由ADE相关抗体介导、异型病毒主动免疫引发和单纯高滴度病毒引发的重症登革的差异，力图揭示重症登革的发生过程和主要影响因素。

登革病毒是目前分布最广、感染人数最多、危害较大的一种虫媒病毒，可引起登革热和重症登革。ADE效应是引起重症登革的最重要假说，但机制尚未阐明，主要原因是缺乏适用的动物模型。本项目建立了可用于ADE效应模型评价的活登革病毒检测的PMA联合RT-QPCR技术，建立了可用于监测登革病毒感染C6/36细胞的数字全息显微术，构建了登革2型病毒365 D2株全长感染性克隆。制备与纯化了1型登革病毒prM蛋白和多肽、NS1蛋白，制备了1、4型登革病毒兔多抗，制备与鉴定了1型登革病毒prM多克隆抗体和单克隆抗体、NS1单克隆抗体，制备了登革病毒2H2和4G2腹水抗体。利用1型干扰素受体抗体，建立登革病毒感染C5BL/6成鼠模型，发现在感染后期（dpi.4-8）毒株在小鼠体内的病毒滴度较高。建立1、4型登革病毒及prM多抗调理THP-1细胞，2型登革病毒攻击的ADE细胞模型，发现在prM多抗为20μg/ml时，感染率达到峰值，约为8.96%，明显增强ADE效应。将prM、E和NS1蛋白特异单抗组合配对分组，初步观察显示，在总抗体滴度低于20μg/ml时，2型登革病毒攻击C5BL/6小鼠单抗免疫组的总体效应均>PBS空白组。获得80余株2014年广东地区登革热大暴发期间流行株，发现不同来源的登革病毒乳鼠神经毒力有差异。分析2005年以来广东省登革1型病毒流行株分子进化特征，发现广东省登革热疫情呈现周期性爆发、本地与输入并存、本地病例所占比例显著高于输入的流行特征。为进一步探讨不同病毒株对重症登革发生的影响创造了条件。. 本项目共发表论文11篇，其中SCI收录论文4篇（JCR1区论文1篇，2区论文2篇，3区论文1篇），总影响因子11.89498。《基于数字全息显微术的登革病毒感染C6/36细胞的3D形态学》被《南方医科大学学报》选为封面文章。《2005年以来广东省登革1型病毒的流行病学及分子进化特征分析》获2018年广东省预防医学会病原微生物与生物安全专业委员会学术年会优秀论文一等奖。培养博士研究生1名，硕士研究生2名。2015年针对广东省空前严重的登革热疫情，提出了《广州市登革热防治策略》，在报告中详细说明了ADE效应对广州市登革热防控可能造成的影响，该报告由广州市政府发至各街镇。