补肾安胎冲剂促进肾虚流产小鼠母胎界面血管新生的内皮祖细胞“归巢”机制

According to traditional Chinese medicine,“the renal and kidney lead reproduction、main bone marrow of Health”、“the baomai are tied to the kidneys”、.EPCs play a key role in angiogenesis,it could be involved in the formation of new blood vessels by be mobilized from bone marrow and homologous to damaged tissue.So We believe that EPCs can be an important entry point for the comprehensive study of TCM theory.Angiogenesis disorders play an important role in abortion,How to promote angiogenesis as an important link in the treatment of abortion.Previous studies have shown,BushenAntai chongji can treat abortion by promoting the formation of blood vessels in the interface of the fetus.Based on these theories and studies,We propose a scientific hypothesis:BushenAntai chongji modified the tube interface of maternal-fetal interface by promoting mobilization of bone marrow EPCs、inducing the nest of EPS.In vivo, we studied the role of multiple parts of bone marrow, peripheral blood and decidua in promoting the mobilization of endothelial progenitor cells. In vitro experiments were conducted to study the effect of endothelial progenitor cells(ECCs) on VECs migration, proliferation and differentiation, and to study the mechanism of Chinese medicine promoting endothelial progenitor cell differentiation.The development of this topic is of great significance to explore the integration and adjustment mechanism of traditional Chinese medicine.

中医理论认为，"肾主骨生髓”、“胞脉系于肾"。EPCs可从骨髓动员并归巢于损伤组织参与新生血管的形成。因此，我们认为EPCs可以作为研究以上中医理论的重要切入点。母胎界面血管生成障碍在流产中扮演重要角色，如何改善缺血部位的血流灌注成为治疗流产的重要环节。前期研究表明，补肾安胎冲剂可通过促进母胎界面血管重铸治疗流产。基于以上理论及研究，我们提出科学假说：该药可能通过促进EPCs的动员和归巢，改善母胎界面血管障碍。体内实验以GFP小鼠BMT肾虚流产模型为研究对象，从骨髓、外周血、蜕膜多部位研究补肾安胎冲剂促进内皮祖细胞动员和归巢的机制。体外实验分别以EPCs、EPCs+VECs非接触共培养模型为研究对象，研究补肾安胎冲剂干预下的内皮祖细胞对VECs迁移、增殖、分化的影响，从细胞层面探讨中药促进内皮祖细胞分化的作用机制。本课题的开展对于探讨中医理论科学内涵、揭示中医药的整合调节机制具有重要意义。

补肾安胎冲剂具有补肾健脾、固冲安胎之效，临床疗效明确，前期研究表明该药可有效改善流产模型母胎界面缺血状况。内皮祖细胞(EPCs)是一种能分化为血管内皮细胞(VECs)的前体细胞，可从骨髓动员并归巢于损伤组织参与新生血管的形成。本项目以EPCs为切入点，通过研究补肾安胎冲剂对EPCs动员、归巢和分化的影响，探讨“肾主生殖”、“肾主骨生髓”中医理论的内涵。体内实验以GFP转基因小鼠骨髓移植模型作为骨髓源性EPCs 的示踪工具，从骨髓、外周血、蜕膜多靶点研究补肾安胎冲剂对EPCs动员和归巢以及相关细胞因子的影响。研究结果表明，补肾安胎冲剂可以显著提高骨髓、外周血及蜕膜组织的EPCs数量；可明显升高外周血VEGF、MMP9、SDF-1α及蜕膜组织VEGF、MMP9、CXCR-4表达水平。该研究提示补肾安胎冲剂可促进骨髓EPCs 的动员，诱导EPCs归巢至母胎界面，其作用环节可能与调控VEGF、MMP9、SDF-1α等细胞因子关系密切。该研究为我们后续进行基于细胞因子探讨EPCs靶向归巢的分子生物学机制提供了重要基础。体外实验分别以EPCs、EPCs+VECs共培养模型为研究对象，研究补肾安胎冲剂对内皮祖细胞增殖、迁移及向VECs分化的影响，从细胞层面探讨中药促进内皮祖细胞分化的作用机制。研究结果表明，补肾安胎冲剂可增强EPCs的增殖活性及迁移能力,10%浓度含药血清在48h增殖率达到最高值；可以显著升高血管新生标记分子VEGF和vWF的表达。EPCs与VECs共培养环境下，药物血清干预下EPCs迁移能力显著增强，对VECs有明显增殖作用。该研究提示补肾安胎冲剂促进EPCs向VECs分化可能与通过刺激VEGF诱导内皮细胞迁移，及通过升高vWF水平有关。本项目为补肾安胎冲剂治疗自然流产提供了新的实验室依据，并为我们进一步从分子生物学层面探讨细胞因子、信号通路等对EPCs生物学行为的影响开辟了新的课题方向。