鲤炎症相关细胞因子特性及在早期免疫应答反应中的作用机制

暴发和多发性鱼类传染性疾病每年可对我国水产养殖业造成高达上百亿元直接损失，在鱼类疫病防控方面，以疫苗免疫为基础的综合防控技术是目前被国际上认可并积极推广的渔业病害防治技术系统。而到目前为止，我国获得国家新兽药证书的水产疫苗产品仅有3种，鱼类分子免疫学研究滞后是造成这一局面的重要原因。炎症相关细胞因子在鱼类早期免疫应答中有重要作用，包括IL-1β, IL-8, TNFα-1,IL-10等因子的诱导表达和调控导致的炎症反应是激发硬骨鱼类早期免疫应答和抵抗病原微生物侵袭的关键。本研究拟通过筛选cDNA文库获得鲤IL-1β, IL-8, TNFα-1,IL-10的编码序列和基因组结构信息，建立系统检测其表达水平的方法，通过模拟感染、RNAi实验和鱼体疫苗接种实验，研究这些细胞因子在细胞和个体水平上的表达情况，分析其激发机体免疫应答反应的作用机制，从而为研制开发高效适用的鱼用疫苗奠定理论和实验基础。

作为渔业大国，水产养殖业在我国占有重要的地位，而暴发和多发性鱼类传染性疾病每年可对该行业造成高达上百亿元直接损失。由于鱼类免疫学尤其是分子免疫学研究的滞后，在鱼类疫病防控方面，最有效的以疫苗免疫为基础的综合防控技术的应用受到很大限制。炎症相关细胞因子在鱼类早期免疫应答过程中尤其是在固有免疫应答中有重要作用，包括IL-1β, IL-8, TNFα-1,IL-10等因子的诱导表达和调控导致的炎症反应是硬骨鱼类抵抗病原微生物侵袭的关键。本研究按照项目的设计，完成了所要求的研究内容，基本达到了项目的研究目的。通过筛选cDNA文库获得了鲤鱼炎症相关细胞因子IL-1β, IL-8, TNFα-1,IL-10的cDNA序列并进一步获得了其基因组结构信息，建立了检测其表达水平的荧光定量PCR方法，通过细胞模拟感染和鱼体疫苗接种实验，分析了这些细胞因子在细胞和个体水平上的表达情况，探讨了其经固有免疫激活后的体内作用机制。1）通过探针标记，文库筛选、序列测定和生物信息学分析，获得鲤IL1β、IL8、TNFα-1、IL-10等细胞因子的全长cDNA序列和编码序列信息。2）以全长cDNA序列为基础，获得鲤IL1β、IL8、TNFα-1、IL-10的基因组序列，分析了其结构组成和转录调控模式。3）建立了检测该类细胞因子表达水平的实时定量RT-PCR检测技术。4）进行了体外的外周血白细胞模拟感染实验，制备的白细胞，经LPS、ConA及植物血凝素处理后，以实时定量RT-PCR分析了不同时间后各类细胞因子的应答情况。5）进行了动物体内实验，鲤分组饲养后，分别腹腔注射poly I:C和经福尔马林灭活制备的致病性嗜水气单胞菌菌苗，分析了上述炎症相关细胞因子在接种后不同时间里在不同组织器官中的表达情况。6）初步建立了此类炎症相关因子表达量的变化与菌苗接种的相互作用关系，为监测鱼类对菌苗的免疫应答效果提供了新的手段。