流感病毒M1蛋白泛素化在病毒复制中的作用与调控机理研究

流感病毒M1蛋白在病毒的转录、vRNP出核以及组装和出芽等多个过程中发挥重要作用。我们前期研究证实，宿主因子CypA能够通过与M1相互作用抑制流感病毒的复制；M1在CypA存在和被敲除的细胞系中会发生不同程度的降解，而这种降解是通过"泛素-蛋白酶体"途径完成的。本研究拟在前期工作基础上，寻找使M1泛素化的连接酶、泛素连接方式、泛素化的关键位点；利用反向遗传技术拯救M1泛素化位点突变的重组病毒，研究重组病毒与野生型病毒在生物学特性和致病力上的差异；解析不同亚型流感病毒的致病力与M1泛素化程度的关系，从而阐明M1泛素化对流感病毒复制的作用和调控机理，为探索A型流感病毒的跨种间传播机制和抗病毒药物的设计提供新的思路。

病毒蛋白修饰在A 型流感病毒的生命周期中具有重要的功能。所有突变体M1都发生了不同程度的降解。所以通过点突变寻找，并未找到M1泛素化的位点。随着质谱分析得出并鉴定了A 型流感病毒A/WSN/1933(H1N1)的M1 蛋白的第132 位酪氨酸为磷酸化位点。这个位点的磷酸化能控制M1 蛋白的入核，对病毒复制是必须的。通过进一步的研究我们证明了这个酪氨酸的磷酸化对M1 蛋白与细胞的核转运受体importin-α1 的结合是关键的。这个位点的突变会减弱这两个蛋白间的相互作用，从而阻碍importin-α1 介导的M1 的入核转运。同时我们证明了导致M1入核的酪氨酸磷酸化修饰能够被Janus kinase 的抑制剂所阻断。我们的结果揭示了酪氨酸磷酸化通过调控M1 蛋白的细胞内运输来影响病毒复制的关键功能。