苛求芽孢杆菌胞内尿酸酶的克隆表达、分子改造和应用

尿酸酶是酶法测定血清尿酸含量的关键工具酶和治疗高尿酸血症的理想药物。我们建立的专利方法(ZL03135649.4)测定血清尿酸对血清中其它成分的干扰抗性强，成本低，效率高，但需特殊尿酸酶。筛选发现苛求芽孢杆菌胞内尿酸酶催化效力高，对竞争性抑制剂黄嘌呤不敏感，能满足此专利方法要求。本项目克隆并原核表达此尿酸酶基因，考察表达产物用于此专利方法测定血清尿酸的有效性和可靠性；同源模建获得其三维结构模型，识别位于构象空间表面对催化活性非必需且相距较远的中性氨基酸残基，通过定点突变将这些中性氨基酸突变成半胱氨酸，纯化原核表达的对应突变体；用高分子量聚乙二醇对巯基进行位点特异性修饰，测定聚乙二醇修饰的尿酸酶突变体治疗实验动物高尿酸血症的有效性和安全性；用基因工程生产此尿酸酶和符合预期的突变体。上述研究可获得适用于我们测定血清尿酸含量专利方法的尿酸酶，并为开发治疗高尿酸血症药用尿酸酶奠定基础。