抗抑郁药引起Gs（alpha）从脂筏转位的分子机制研究

研究发现不同种类的一线抗抑郁药均使Gs（alpha）从细胞膜脂筏部位转移至非脂筏部位，从而引起细胞腺苷酸环化酶活性增加。但是因抑郁症而自杀的病人大脑组织细胞膜脂筏的Gs（alpha）含量则增多，并且腺苷酸环化酶活性降低。本课题应用生物化学结合形态学方法揭示抗抑郁药是否通过增加组蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）的活性而减少脂筏乙酰化-α-微管蛋白（Ace-Tub）的含量，从而降低Gs（alpha）和微管蛋白在脂筏部位的结合而使Gs(alpha)转位。通过此项研究揭示了抗抑郁药引起Gs（alpha）转位的根本原因，对于确定Gs（alpha）作为抑郁症的生物标志及揭示抑郁症的发病机制、开发新的抗抑郁药物以及发现新的治疗抑郁症的方案都将起到十分重要的作用。

本课题旨在通过生化和形态学方法研究抗抑郁药引起脂筏Gsα转位的机制，应用抗抑郁药和组蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）抑制剂tubastatin A慢性处理C6神经胶质瘤细胞（C6细胞），提取出脂筏后用Western blot 检测脂筏部位Gsα的含量，发现tubastatin A并不影响抗抑郁药引起的脂筏Gsα含量的降低；免疫荧光染色，激光共聚焦显微成像发现，tubastatin A不影响抗抑郁药引起的Gsα与脂筏标记物cholera toxin B （CTXb）亚单位共定位的降低。而且发现HDAC6抑制剂也不影响抗抑郁药引起的脂筏部位乙酰化-α-微管蛋白含量的降低，这些结果提示：抗抑郁药引起脂筏Gsα的转位与HDAC6活性没有关系。但是本课题证实了多不饱和脂肪酸DHA显著性降低脂筏Gsα的含量，并且增强抗抑郁药引起的脂筏Gsα转位，同时发现DHA呈浓度依赖性增加腺苷酸环化酶水平，这些结果表明DHA通过引起脂筏Gsα转位而增强Gsα与细胞膜腺苷酸环化酶的偶联，启动抗抑郁效应的信号通路。生化方法发现DHA并不改变脂筏标记蛋白caveolin-1的表达，激光共聚焦显微成像发现DHA呈浓度依赖性增加脂筏的含量，表明DHA引起脂筏Gsα的转位并不是因为改变脂筏成分或破坏脂筏。同时实时RT-PCR和Elisa实验发现DHA促进C6细胞神经胶质细胞源性的神经营养因子（GDNF）的释放，并进一步证实DHA促进GDNF的释放通过激活PKC-ERK途径，而非PKA途径。通过此部分的研究揭示DHA具有多靶点抗抑郁作用，为在临床开发新的抑郁药物及发现新的治疗抑郁症的方案起到提供重要的实验证据。并且研究发现快速抗抑郁作用的氯胺酮不引起脂筏Gsα的转位，证实其快速抗抑郁效应与多巴胺D2/D3受体而非D1受体有关。