miR-140促进CYP2J2基因表达对动脉粥样硬化中血管炎症的调控作用及机制研究

Cytochrome P450 epoxygenases 2J2 (CYP2J2) is protective against atherosclerosis and inflammation, but the upstream regulatory mechanism are not yet fully understood. miRNAs are a class of non-coding RNA which associated with atherosclerosis relevant pathophysiological processes. In the previous study, we found that miR-140 significantly increased CYP2J2 expression. We hypothesized that miR-140 increases CYP2J2 expression by antagonizing RNA binding protein TTP (tristetraprolin) mediated CYP2J2 mRNA degradation. In this project, we firstly research if RNA-binding protein TTP binds to the CYP2J2-3'UTR by co-immunoprecipitation and electrophoretic mobility shift assay; Secondly, we investigate the effect of miR-140 binding to CYP2J2-3'UTR is to prevent CYP2J2 mRNA degradation mediated by TTP, resulting in elevated CYP2J2 expression; Finally, we investigate the effect of miR-140 mediated CYP2J2 protein up-regulation on LPS induced inflammation in vascular endothelia cells. This project will provide important theoretical basis and experimental basis miRNA targeted therapy for prevention and treatment of atherosclerosis.

细胞色素P450表氧化酶（CYP2J2）具有减轻炎症反应、抗动脉粥样硬化等作用，但其上游调控机制尚未完全阐明。microRNAs（miRNAs）是一类在多种与动脉粥样硬化相关的病理生理过程中发挥重要调控作用的非编码RNA。在前期研究中，我们发现miR-140促进CYP2J2基因表达。我们推测：miR-140与RNA结合蛋白TTP(tristetraprolin)竞争性结合CYP2J2的3’UTR，促进CYP2J2表达，从而减轻血管炎症。本项目中，我们将通过免疫共沉淀、电泳迁移率实验等方法研究TTP是否与CYP2J2的3’UTR结合；并从多角度研究miR-140促进CYP2J2表达与TTP直接相关；最后通过脂多糖诱导血管内皮细胞炎症反应，研究miR-140促进CYP2J2表达对血管炎症的影响，本项目将为动脉粥样硬化的防治和针对miRNA的靶向治疗研究提供重要的理论依据和实验基础。

细胞色素P450表氧化酶（CYP2J2）具有减轻炎症反应、抗动脉粥样硬化等作用，但其上游调控机制尚未完全阐明。microRNAs（miRNAs）是一类在多种与动脉粥样硬化相关的病理生理过程中发挥重要调控作用的非编码RNA，多数通过抑制靶基因稳定性或表达发挥作用。我们发现在CYP2J2的3’UTR有miR-140的结合位点，然而转染miR-140可促进CYP2J2基因表达。通过信息学软件，我们发现CYP2J2的3’UTR的miR-140的结合部位存在AU富集区（ARE），ARE是RNA结合蛋白（tristetraprolin，TTP）的经典结合区域，可以导致靶RNA的降解。我们推测：miR-140与RNA结合蛋白TTP竞争性结合CYP2J2的3’UTR，促进CYP2J2表达，从而减轻血管炎症。本项目中，1)通过荧光素酶报告基因实验，我们证实miR-140在转录后水平促进CYP2J2的表达；2）我们通过免疫共沉淀、电泳迁移率实验等方法证实TTP与CYP2J2的3’UTR结合并导致CYP2J2表达减少；并从多角度证实miR-140与TTP竞争性结合CYP2J2的3’UTR，从而促进CYP2J2表达；3）最后通过脂多糖诱导血管内皮细胞炎症反应，发现miR-140促进CYP2J2表达减轻LPS诱导的血管炎症。本项目将为动脉粥样硬化的防治和针对miRNA的靶向治疗研究提供重要的理论依据和实验基础。