Tim-3在活动性肺结核免疫抑制中的作用和机制研究

结核分枝杆菌抑制机体免疫的机理尚不清楚,对CD4+Th1细胞和CD8+T细胞功能有影响的受体改变可能对结核免疫发挥关键作用。Tim-3主要表达在Th1细胞和CD8+T细胞表面，能抑制T细胞免疫，促进T细胞耐受。我们前期试验用荧光定量RT-PCR和流式细胞术发现，活动性肺结核病人外周血单个核细胞Tim-3 mRAN水平增高，CD8+T淋巴细胞Tim-3表达增加，排菌病人尤为显著。因此我们将应用酶联免疫、RT-PCR、流式细胞术、免疫组化和RANi等技术进一步研究Tim-3在活动性肺结核病人T细胞亚群(尤其是抗原特异性T细胞)的表达情况；研究Tim-3与细胞免疫功能的关系及阻断此信号通路对T细胞免疫功能的影响；研究病灶局部Tim-3的表达及与T细胞效能分子的关系，及和整体情况的区别；并用基因芯片等技术初步筛验Tim-3免疫抑制的信号通路.以揭示Tim-3信号通路在结核病免疫抑制中的作用和机制.

本课题旨在研究Tim-3（T-cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3)在活动性肺结核免疫抑制中的作用。已完成大部分研究内容，实现了主要的研究目标，并对研究内容有所扩展。研究了Tim-3在活动性肺结核患者外周血CD4+、CD8+T细胞，NK细胞及结核分枝杆菌抗原特异性T细胞的表达，发现Tim-3在CD8+T细胞的表达高于CD4+ T细胞，活动性肺结核患者的CD4+T细胞，CD8+T细胞上Tim-3的表达显著高于正常对照组，CD8+T细胞上的表达差别尤其显著，NK细胞上Tim-3表达无显著差别；活动性肺结核患者结核分枝杆菌抗原特异性T细胞的Tim-3表达显著增高，痰菌阳性患者抗原特异性T细胞上Tim-3的表达显著高于痰菌阴性患者。追踪病人变化，发现有效的抗结核治疗2个月后，T细胞Tim-3的表达显著下降；以上内容提示T细胞上Tim-3的表达与活动性肺结核的病情相关。研究了Tim-3表达与CD8+T 细胞功能的关系，发现在Mtb特异性抗原刺激下，Tim-3的表达与CD8+T细胞IFN-gamma、CD107a、Ki67的表达呈负相关，阻断实验发现Tim-3途径被阻断后，PBMCs分泌IFN-gamma的水平显著上升；以上内容提示Tim-3抑制T细胞的吞噬杀伤功能和增殖能力，抑制细胞免疫功能。项目申请书中有5项研究内容和研究目标，以上是其中的3项研究内容和研究目标，已以论著形式发表在Journal of Infection期刊上。项目申请中的另2项研究内容，其一是研究Tim-3在活动性肺结核病灶局部的表达和分布特点，已有的局部病灶病理学免疫组化研究发现肺结核病灶内巨噬细胞上Tim-3表达水平高，正在积累合适的样本，以明确Tim-3在结核病灶局部的特征性变化，Tim-3在活动性肺结核单核巨噬细胞上的表达特点和关系的研究已基本成文，准备投稿；其二是用RNA干扰技术进行T细胞Tim-3基因敲减，此项内容已设计了shRNA，但构建的慢病毒载体转染效率低，正在改善中。在完成项目书中的研究内容的过程中，我们研究了初治活动性肺结核病人外周血Tim-3+T细胞群内记忆细胞的分布特点，结核分枝杆菌抗原特异性反应性分子在活动性肺结核的特点，其他免疫抑制受体在结核病的分布，相关内容已发表。