LTF遗传变异影响鼻咽癌发生发展的分子机制研究

Funded the previous project of the National Natural Science Foundation, our study confirmed the SNPs (rs2073495 and rs9110) is closely related with nasopharyngeal carcinoma(NPC),which SNPs located on nasopharyngeal carcinoma candidate susceptibility gene LTF and on chromosome 3p21 region. This project is planned on the basis of previous study to clarify the relationship between genetic variation of LTF and nasopharyngeal carcinoma deeply. First,we aim to confirm the relationship between genetic variation and the level of expression of LTF in large sample. Second, we use MALDI-TOF/TOF and western-blot techniques to study effect of genetic variation and the MAPK molecular pathway, and to explore its possible mechanism closely related to the NPC. Then we build their characteristic miRNA expression profiling and methylation expression profiling, and use multivariate analysis methods ,such as of the proportional-hazards regression model, to further investigate the specific SNPs molecular markers, gene expression levels and gene - environmental factors role in the development of NPC.

在前一国家自然科学基金项目资助下，我们研究证实位于染色体3p21区域的鼻咽癌候选易感基因LTF的两个SNP位点（rs2073495和rs9110）与鼻咽癌发生密切相关。本项目拟在此研究基础上，对上述LTF遗传变异（rs2073495和rs9110及其单体型分子标志）在鼻咽癌中的作用及其机制进行深入研究。首先，扩大研究样本，确认该遗传变异与LTF表达水平之间的关系。其次，利用MALDI-TOF/TOF以及western-blot等技术研究该遗传变异对MAPK信号传导通路的影响，探讨其与鼻咽癌密切相关的可能机制。然后，构建其特征性miRNA表达谱与甲基化表达谱，并运用比例-风险（proportional－hazards）回归模型等医学多因素分析方法进一步考察特征性SNPs分子标志、基因表达水平以及基因-环境因素在鼻咽癌发生发展中的作用。

在前一国家自然科学基金项目资助下，我们研究证实位于染色体3p21区域的鼻咽癌候选易感基因LTF的两个SNP位点（rs2073495和rs9110）与鼻咽癌发生密切相关。本项目拟在此研究基础上，对上述LTF的遗传变异在鼻咽癌中的作用及其机制进行深入研究。首先，扩大研究样本，确认该遗传变异与LTF表达水平之间的关系。其次，利用western-blot等技术研究该遗传变异对MAPK信号传导通路的影响，探讨其与鼻咽癌密切相关的可能机制。然后，构建其特征性miRNA表达谱与甲基化表达谱，并运用比例-风险回归模型等医学多因素分析方法进一步考察特征性SNPs分子标志、基因表达水平以及基因-环境因素在鼻咽癌发生发展中的作用。.在本项目的资助下，我们发现拥有‘A-G-G-T’单体型的个体其LTF基因的mRNA和蛋白表达水平高于非‘A-G-G-T’单体型的个体；同时发现LTF基因‘A-G-G-T’单体型与MAPK信号传导通路中关键分子JNK2和c-Jun等密切相关；我们利用LTQ-Orbitrap质谱技术构建了拥有‘A-G-G-T’单体型/不拥有‘A-G-G-T’单体型的差异蛋白表达谱，发现并证实JNK2在所有鼻咽癌组织中的表达水平高于鼻咽部慢性炎症组织，且JNK2在不拥有‘A-G-G-T’单体型的样本中的表达水平要高于拥有此单体型样本；利用miRNA芯片技术，我们发现在‘A-G-G-T’单体型中表达上调的前20个miRNA分子中，我们发现hsa-miR-1256和hsa-miR-659是JNK2基因的潜在调控miRNAs；并在鼻咽癌和鼻咽部慢性炎症组织中验证hsa-miR-1256和hsa-miR-659等在不拥有‘A-G-G-T’单体型的样本中表达下调，从miRNA层面证实了LTF基因的多态性影响JNK2表达水平。此外，我们还发现CD38分子在鼻咽癌侧群细胞（SP细胞）中表达上调，而调控CD38基因的miR-634，miR-664和 miR-140-5p分子在SP细胞中表达下调，CD38可能是通过影响ZAP70和CXCR4等分子来参与鼻咽癌的发生与发展过程。研究还证实PI3K/Akt信号通路的异常调控影响鼻咽癌SP细胞的细胞周期分布和细胞凋亡比例。本项目的成功实施为鼻咽癌病因和发病机制探讨提供了理论和实验依据。