orexin在急性/慢性癫痫大鼠海马中表达及对海马内r-氨基丁酸释放的影响

Orexin（OXs）是1998年首先在下丘脑发现的小分子肽，目前已证实可参与食欲、能量平衡、以及睡眠与觉醒状态的调控。近期的研究发现OXs的基因编码在颞叶海马内有激活；在培养的下丘脑神经元，OXs可增加中枢抑制性神经递质GABA 介导的自发抑制性突触后电流的发放频率。因此，OXs在GABA传递过程中的调控作用可能对癫痫神经元放电的传播和扩散起着一定的抑制作用。本课题拟采用逆转录实时PCR和原位杂交技术研究在实验性急性/慢性癫痫大鼠海马神经元内OXs的表达，并采用微透析和高效液相色谱法观察OXs对急性/慢性癫痫大鼠海马GABA释放的影响。通过观察OXs在癫痫模型引发的一系列神经生化、分子生物和电生理改变，对Oxs在自发痫性活动或癫痫持续状态的发生和发展过程中的作用进行研究，为抑制癫痫模型神经元过度放电开拓新的研究领域。

Orexin（OXs）是1998年首先在下丘脑发现的小分子肽，近期的研究发现OXs的基因编码在颞叶海马内有激活；在培养的下丘脑神经元，OXs可增加中枢抑制性神经递质GABA 介导的自发抑制性突触后电流的发放频率。因此，OXs在GABA传递过程中的调控作用可能对癫痫神经元放电的传播和扩散起着一定的抑制作用。本课题拟采用逆转录实时PCR和原位杂交技术研究在实验性急性/慢性癫痫大鼠海马神经元内OXs的表达，并采用微透析和高效液相色谱法观察OXs对急性/慢性癫痫大鼠海马GABA释放的影响。.方法 研究1：用海人酸（KA）腹腔注射诱发大鼠癫痫发作，于癫痫终止后8h、1d、3d、7d和慢性复发时间点行免疫组化方法、RT-PCR检测大鼠皮层、海马和下丘脑prepro-orexin mRNA表达。研究2：采用免疫组化方法检测prepro-orexin，Orexin-A，and Orexin-B免疫反应阳性细胞数及其神经纤维的变化。研究3：术后5天在海马灌注orexin-A，orexin-B，采用微透析方法每10分钟收集标本，采用高效液相方法检测GABA浓度。.结果发现：研究1：在皮层和海马prepro-orexin mRNA表达增高，在第1天达最高值，下丘脑prepro-orexin mRNA表达减少，在第1天最低。研究2：prepro-orexin和Orexin-A免疫阳性细胞与orexin-B免疫阳性细胞的分布主要在下丘脑和穹窿周围核，在海马有可疑阳性，其免疫阳性神经纤维分布广泛；orexin-B免疫阳性细脃数呈现为先稍微减少后恢复，之后减少再恢复的趋势，7d组细胞数减少（P<0.05），免疫反应神经纤维平均光密度值呈现出与其细胞数相反的变化。各组之间prepro-orexin阳性细胞数进行方差分析表明其差异并不显著，P>0.05；其免疫阳性神经纤维主要分布在下丘脑、丘脑室旁核及海马。研究3：注射orexin-A后10,20,50分钟时GABA浓度增高。注射orexin-B后10分钟时GABA浓度增高，而在20,30,40,50分钟时下降。.结论提示：prepro-orexin、Orexin-A、orexin-B细胞数及其神经纤维在大鼠癫痫发生过程中的变化，表明其可能参与了癫痫的神经元放电和传播的调节，通过增加其浓度有助于对癫痫的控制。