冬虫夏草对中风后遗症“肾虚痰瘀”大鼠模型的干预及其对脑线粒体呼吸链电子漏的调控机制

We have reported the Cordyceps sinensis extract (CSE) significantly reduced focal cerebral ischemic/reperfusion injury. The purpose of this study was to investigate the defense mechanism of CSE against sequelae of apoplexy with TCM standards of Shenxu-tanyu. Protective effect of CSE against NMDA insults was studied by molecular biology and molecular pharmacology. Then the protective effect of CSE against endothelial dysfunction induced by cellar injury model was studied by cell biology and serum pharmacology. Also, the protective effect of CSE against sequelae of apoplexy of Shenxu-tanyu was studied on animal model. The protective mechanism of CSE was studied on the subcellsular level of the damage of mitochondrial function and mitochondrial electron leak of respiratory chain. We want to establish animal model of sequelae of apoplexy with TCM standards of Shenxu-tanyu. The protective mechanisms of CSE on sequelae of apoplexy of Shenxu-tanyu were studied on the animal model, cell, molecular and subcellsular level. It will provide theoretical support to prevention and treatment of ischemic stroke with TCM.

前期研究发现冬虫夏草提取物（CSE）对大脑中动脉阻断 (MCAO)所致局限性脑缺血大鼠具有明显的保护作用。然而，按中医肾虚痰瘀证标准评价CSE对中风后遗症"肾虚痰瘀"大鼠的干预作用是我们要解决的新课题。我们首先采用分子生物学和分子药理学方法，体外研究CSE对兴奋性NMDA诱导的大鼠海马神经元毒性的保护作用；再采用细胞生物学方法结合血清药理学方法，研究CSE对血瘀证的血管内皮细胞损伤模型内分泌、胞内游离钙浓度以及细胞骨架微丝影响；然后采用整体动物模型观察评价CSE对中风后遗症"肾虚痰瘀"的干预作用。在证实CSE的整体疗效的基础上，研究其抗中风后遗症"肾虚痰瘀"线粒体功能损伤及对呼吸链电子漏的调控的机制。我们期望建立符合中医肾虚痰瘀证标准的缺血性中风模型，从整体、细胞、分子、亚细胞水平深入研究CSE防治缺血性脑中风的作用机制,为有效发挥传统屮医药防治缺血性脑屮风的优势提供理论支持。

前期研究发现冬虫夏草提取物（CSE）对大脑中动脉阻断（MCAO）所致局限性脑缺血大鼠具有明显的保护作用。然而，按中医肾虚痰瘀证标准评价CSE对中风后遗症"肾虚痰瘀"大鼠的干预作用是我们要解决的新课题。.在这项研究中，CSE对缺血再灌注大鼠引起脑损伤的保护作用是通过抑制IR诱导的炎性细胞因子IL-1、TNF-α上调，阻断炎症相关的因子（MPO、ICAM-1）和在缺血脑组织中促氧化的酶COX-2、iNOS的表达。研究结果表明，冬虫夏草水提取物和醇提取物对炎症抑制引起的脑缺血有神经保护作用。.我们发现，冬虫夏草可以改善脑缺血大鼠的神经功能缺失症状，对局灶性脑缺血大鼠的神经元起到一定的保护作用；大鼠基因芯片分析的结果显示冬虫夏草调控的差异表达基因主要通过抗炎、抗凋亡、抗氧化等途径对缺血性神经元起到保护作用，还可以通过神经再生等作用对缺血部位的脑组织进行修复等等；基于芯片的结果，利用Real-time PCR技术证实Hcn2、Pcsk2、Flrt3、Nr3c2、Hspa12a、Slc6a1因子在转录水平上的上调可能是冬虫夏草干预脑缺血损伤的发生发展过程中起关键作用的分子基础。.蛋白芯片研究结果显示，与假手术组相比，模型组大鼠脑组织中VEGFR1、TNF-α、TNF-R2、Caspase-8、Bcl-10、Bcl-x、IGF-I、ER-β表达均降低，与模型组相比，冬虫夏草组大鼠脑组织中VEGFR1、TNF-α、TNF-R2、Caspase-8、Bcl-10、Bcl-x、IGF-I、ER-β表达增强，筛选出的功能蛋白涉及细胞凋亡、血管新生、炎症反应等多种过程。.建立脑微血管内皮细胞拟缺血损伤模型，我们发现CSE可通过减少TNF-α和IL-1β水平、增加SOD活性，降低MDA，NO含量，减少凋亡细胞数量，从而发挥脑保护作用。.CSE通过增加脑缺血损伤大鼠ATP含量，抑制线粒体膜电位的降低，增加线粒体呼吸链复合物I、II、III、IV，从而发挥线粒体功能的脑保护作用。.CSE通过降低脑缺血损伤大鼠超氧阴离子含量，增加细胞色素C氧化酶活性，降低Cyt-c、Bax、caspase-3蛋白表达，增加Bcl-2蛋白表达，增多caspase-3、caspase-8、caspase-9含量，从脑线粒体呼吸链电子漏及其旁路的调控发挥脑保护作用。