Hedgehog信号通路上调淋巴内皮生长因子表达促进胰腺癌淋巴结转移的实验研究

目前发现淋巴内皮生长因子在肿瘤淋巴路转移中发挥重要作用；Hedgehog通路（Hh通路）能上调多个淋巴内皮生长因子的表达；本实验室前期研究发现Hh通路活化与胰腺癌淋巴结转移显著相关，提示该通路可能参与胰腺癌的淋巴结转移。本项目采用Real-time PCR、Western Blot、RNA干扰、免疫组化、活体荧光成像等方法，对Hh通路促进胰腺癌淋巴结转移的机制进行研究。首先刺激或阻断胰腺癌细胞Hh通路，观察癌细胞中Hh通路不同程度活化对淋巴内皮生长因子表达水平的影响，及其对淋巴内皮细胞体外增殖、迁移、管腔样结构形成的影响；然后建立高表达和低表达Hh通路的胰腺癌原位移植瘤模型，观察癌组织中Hh通路不同程度活化对淋巴内皮生长因子表达的影响，及对淋巴管新生、淋巴结增生及胰腺癌淋巴结转移的影响。旨在探讨位于淋巴内皮生长因子上游的Hh通路在胰腺癌淋巴结转移中的作用，为抗胰腺癌转移治疗提供理论依据。

Hedgehog信号通路能促进多个淋巴内皮生长因子的表达，而淋巴内皮生长因子在肿瘤的淋巴路转移中发挥着重要作用。我们前期研究发现，Hh信号通路活化与胰腺癌的淋巴结转移显著相关，提示该通路可能参与胰腺癌的淋巴结转移，但其机制尚未完全阐明。本研究发现，活化hedgehog通路能促进胰腺癌SW1990细胞分泌VEGF-C，从而促进与SW1990细胞共培养的淋巴内皮细胞的增殖迁移、管腔结构形成，而感染GLI1siRNA腺病毒后SW1990细胞GLI1蛋白的表达明显降低，上清液中VEGF-C的活性也显著降低，提示GLI1siRNA腺病毒通过抑制hedgehog通路抑制了SW1990细胞VEGF-C蛋白的表达。进一步建立SW1990-GFP组、SHH-SW1990组、GLI1siRNA-SW1990组裸鼠胰腺癌原位移植瘤模型，结果SHH-SW1990组肿瘤GLI1及VEGF-C蛋白表达均显著高于SW1990-GFP组肿瘤，而GLI1siRNA-SW1990组肿瘤GLI1及VEGF-C蛋白表达均显著低于SW1990-GFP组肿瘤。SHH-SW1990组肿瘤瘤周淋巴管增生显著多于SW1990-GFP组肿瘤，转移至淋巴结的癌细胞数显著多于SW1990-GFP组肿瘤，其LVD显著高于SW1990-GFP组肿瘤，而GLI1siRNA-SW1990组肿瘤瘤周淋巴管增生显著低于SW1990-GFP组肿瘤，转移至淋巴结的癌细胞数显著少于SW1990-GFP组肿瘤，其LVD显著低于SW1990-GFP组肿瘤，提示Hh通路活化可促进VEGF-C的表达从而促进胰腺癌瘤周淋巴管新生及癌细胞的淋巴结转移。