水稻粗线期染色体的微切割与目的基因的克隆

运用改良的染色体显微切割程序和PCR技术，成功的构建了水稻4号染色体区带特异性探针池，并且用荧光原位杂交技术证实了这个探针池的特异性。在本实验中改进的技术主要有：水稻根尖分生区细胞分裂的同步化、中期染色体滴片技术，用石蜡油防止收集液滴的蒸发，精密的显微切割操作技术和原位荧光杂交技术等。结果显示可以准确识别水稻细胞分裂前中期4号染色体，在玻片上切割以后，经蛋白酶消化提纯DNA，Sau3AI酶消化，消化产物连接到连接-适配序列上，然后以适配序列为引物作PCR扩增，此PCR产物即为探针池。