一氧化氮供体药物JS-K抗乙肝病毒作用机制研究

HBV-related disease is one of the major diseases threating human health. Nowadays, nucleoside analogues and interferon are the important drugs against HBV. Although,these drugs have a certain effect, there are also have some side effects, and the resistance against nucleoside analogues are increasing gradually. So, it is very important to develop new drug against HBV. JS-K, a diazeniumdiolate-based nitric oxide-releasing prodrug, designed to target overexpressed GST in tumor cells, is effective against a variety of tumor cells. It has not been reported that JS-K inhibit the replication of virus so far. We found JS-K could inhibit the secretion of HBsAg and HBeAg in HepG2.2.15 cell line, which could support persistent replication of HBV and produce intact HBV particles. This study will reveal the role and target of anti-HBV effect of JS-K in vitro and in vivo by molecular biology and cytobiology, and it could provide an alternative therapeutic approach for HBV infection.

HBV相关性疾病是当今威胁人类健康的主要疾病之一，现在的抗病毒治疗药物主要有核苷类似物及干扰素。这些药物虽有一定疗效，但也存在不良反应，而且针对核苷类似物的耐药性也逐渐增加。因此，新型抗HBV药物的研究具有更重要的意义。JS-K是一种偶氮鎓二醇盐类一氧化氮供体药物，能以谷胱甘肽-S-转移酶（GST）为靶点，与在肿瘤细胞中过表达的GST结合而释放NO，从而发挥药效作用，现多用于各种肿瘤性疾病的治疗，至今尚未见JS-K抗病毒的研究报道。本课题组在预实验中发现：在HBV能够复制并产生完整病毒颗粒的肝癌细胞株HepG2.2.15中，JS-K能抑制HBV的两个重要抗原--乙肝表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的表达。本研究将利用分子生物学以及细胞生物学技术，通过体内外实验研究进一步阐明JS-K抗HBV复制的效应机制及其靶标，以期为开发新的抗HBV感染治疗手段提供坚实的实验依据。

HBV 相关性疾病是当今威胁人类健康的主要疾病之一，现在的抗病毒治疗药物主要有核苷类似物及干扰素，但由于耐药性及药物不良反应的存在，寻找新型抗 HBV 药物的研究具有重要意义。JS-K 是一种偶氮鎓二醇盐类一氧化氮供体药物，本研究结果发现：在HBV阳性的肝癌细胞HepG2.2.15中，JS-K能有效升高细胞内一氧化氮（nitric oxide, NO）的含量，降低细胞上清中HBsAg和HBeAg的分泌，降低细胞ROS的含量和线粒体膜电位，但JS-K不能有效降低细胞HBV DNA的拷贝量。在新建的HBV细胞模型（HBV阳性血清感染过表达NTCP的Hep1细胞，NTCP-SK-Hep1细胞）中发现，JS-K 在一定的浓度范围内具有抑制HBV DNA拷贝量和相关抗原分泌的作用。在HBV转基因小鼠和以高压水动力法建立的C57及Balb/c HBV转染小鼠动物模型中，通过研究发现：尽管JS-K对小鼠无毒性作用，但它在体内无明显抗HBV的作用。鉴于体内实验无效，JS-K作为一个潜在抗HBV药物的开发意义不大，故本项目调整了研究方向，发现JS-K能抑制HBV阳性肝癌细胞HepG2.2.15的增殖，促进细胞凋亡，其机制与将细胞阻滞在G2期，诱导细胞发生DNA损伤有关。同时，在肝癌细胞Hep3B中，JS-K还能通过促进凋亡相关基因的表达发挥抗肿瘤作用。本研究已发表论文6篇，其中SCI收录2篇，核心期刊3篇，省级期刊1篇。另有1篇SCI、2篇中文文章在撰写中，培养教授1名，硕士研究生2名。