推拿通过含miR-146a的胞外囊泡调控固有免疫应答维护骨关节炎关节稳态的机制研究

Massage has unique advantage and potential treatment to relieve pain and improve joint function of patients with osteoarthritis (OA). Deepen understanding of its mechanism of action, which can help to find the critical path and molecules of OA, and to promote the development of new treatments further. The key event of the occurrence and development of OA is the imbalance of joint homeostasis, characterized by the synovial inflammation, and the internal environment of the cells, tissues and liquid involves a series of complicated mechanism. Our early researches show that toll-like receptors (TLRs) inducing inflammation and the expression of related genes could repair damaged joints, organization, and the effect could not be ignored, mediated by the innate immune response is a key link in the process of steady state influence OA joints. The latest study found that extracellular vesicles, which carry information such as microRNA, can regulate the steady state of the joint by participating in signal transduction in the response. This subject will the regulation of miR-146a-containing-EVs through innate immune response of TLRs mediated involved in maintenance of OA joint homeostasis using the advanced experimental technology in vivo and in vitro experiments. On this basis to explore the regulation effect of massage on the above mechanism. To provide experimental parameters for the targeted therapy of OA, and to provide molecular biological support for the promotion of traditional Chinese medicine massage therapy.

推拿对缓解骨关节炎（OA）患者疼痛、改善关节功能具有独特的作用优势和治疗潜力，加深对其作用机制的理解，有助于发现调节OA的关键途径，推动新疗法的发展。OA发生发展是以滑膜炎症为主要特点的关节稳态失衡，这种细胞、组织、液体间的内环境互联涉及复杂的机制。本团队前期研究表明，由Toll样受体（TLRs）介导的固有免疫反应在诱导炎症反应及相关基因的表达和修复受损关节组织上有着不可忽视的作用，是影响OA关节稳态的关键环节。而最新的研究发现，一种携带了microRNA等信息物质的胞外囊泡（EVs）可以通过参与上述反应中的信号转导发挥调节关节稳态的作用。本课题拟通过体内外实验，采用先进的实验技术，研究含miR-146a的EVs通过对TLRs介导的固有免疫反应的调控参与维护OA关节稳态的具体过程，在此基础上探讨推拿对其的调控作用。为OA的靶向治疗提供实验参数，也为传统中医推拿疗法的推广提供分子生物学支持。

推拿对缓解骨关节炎（OA）患者疼痛、改善关节功能具有独特的作用优势和治疗潜力，加深对其作用机制的理解，有助于发现调节OA的关键途径，推动新疗法的发展。胞外囊泡（EV）可富集并递送microRNA（miRNA）等信息物质，通过参与Toll样受体（TLRs）介导的固有免疫反应在诱导炎症反应及相关基因的表达和修复受损关节组织的信号转导发挥调节关节稳态的作用。本项目通过运用生物信息学、细胞生物学、分子生物学等方法与技术，对与OA固有免疫系统的炎症途径中相关性最强的miRNA进行筛选，在体内、外，探寻EV介导下的差异miRNA通过固有免疫反应在OA中的作用机制和调控功能，在此基础上，研究“舒筋活络”推拿法通过上述途径对OA关节稳态的维护作用。我们的研究结果表明，滑膜成纤维细胞（FLS）分泌的EV作为细胞与细胞之间通信的介质，通过向受体细胞——软骨细胞递送miRNA（miR-146a、miR-150-3p），靶向调控固有免疫应答中TLR4/TRAF6/NF-κB和Trim14/NF-κB/IFNβ转导途径，发挥维护关节稳态、修复关节软骨损伤、调节滑膜细胞炎症和表型、延缓OA进程等生物学功能;“舒筋活络”推拿法可通过上述固有免疫反应关联网络中互相紧密联系的各元件及转导途径，调控FLS活性、凋亡、周期、迁移和侵袭，有效抑制FLS的浸润性生长，减轻滑膜增殖和炎性细胞浸润、减缓OA滑膜炎症反应，实现OA关节保护和延缓OA进程的治疗作用。这些重要的发现不仅为进一步了解OA病理机制提供了新见解，也为监测OA关节健康提供了一个有吸引力的生物标志物候选来源并为做出与这些小分子的变化相关的最适当的治疗计划具有较有意义的启发。同时，将传统中医推拿手法的作用机制深入到分子层面，通过探讨其对OA调控机制的具体环节，弥补了由于缺乏大规模系统的分子学研究对传统推拿手法治疗OA的机制理解和靶点识别与开发的限制，使中医特色项目的应用和推广更具有分子学合理性，为后续对OA机制研究的深入和临床上更精确、有效的治疗提供新方向。