丹参-红花配伍活血化瘀功效物质与协同增效相互作用研究

The compatibility of the medicine for activating blood circulation of Danshen and Honghua shows synergistic activating blood effect. Proposal: The compatibility of Danshen and Honghua has specific features on the dose-effect changes, therefore displays synergistic effect through the interaction of active components in vivo and in vitro. Based on above consideration, this project intends to carry out works as follows: (1) To establish appropriate methods for evaluation effect of activating blood, and further elucidating compatibility effect of Danshen-Honghua, then integrating effect through the multi-index comprehensive index method; to analyze quantitatively the changes of main components in the compatibility of Danshen and Honghua by modern spectroscopy tandem technology; to identify the hierarchical effect or substance for invigorate the circulation of blood of Danshen-Honghua by the fitting analysis of artificial neural networks; to whole effect validate the main components in the compatibility of Danshen and Honghua by selective knock-out. (2) Response surface analysis method will be used to quantitatively evaluate the dose range and extent of synergistic effect, and to systematically reveal the properties of the interaction of the compatibility of Danshen and Honghua from pharmacodynamics. (3) Multi-component pharmacokinetic-pharmacodynamics and metabolomics approach will be used to explore the interactive and synergistic mechanisms of the compatibility of Danshen and Honghua. Based on these studies, we can finally reveal the scientific connotation of the compatibility of Danshen and Honghua, and will explore ideas and methods for compatibility of traditional Chinese medicines.

基于中医药临床应用特点与项目组前期研究发现活血化瘀药丹参与红花配伍具有协同增效作用。提出：丹参-红花配伍具有特定的量效特点，并通过其效应物质体内外相互作用而实现协同增效。因此，拟开展工作如下：（1）建立适宜的活血化瘀功效评价方法，对丹参-红花配伍效应进行评价，并通过多指标综合指数法进行效应整合；采用现代谱学联用技术对丹参-红花主要成分进行定量分析。最后运用人工神经网络拟合分析对丹参-红花配伍活血化瘀功效物质进行分级辨识，进而采用选择性定向剔除技术进行整体效应验证。（2）采用响应曲面分析法定量评价丹参-红花活血化瘀协同增效的剂量范围与程度，揭示其配伍药效相互作用的性质与特点。（3）通过多组分PK-PD相关性分析与比较代谢组学方法研究丹参-红花配伍的相互作用机制。最终揭示丹参-红花配伍应用的科学内涵，为中药配伍现代基础研究提供思路与方法的探索。

本项目基于中医临床应用分析，选择丹参-红花药对作为主要研究对象，采用适宜的方法与技术研究其配伍前后生物效应与物质基础的变化规律，为阐明药对组成-剂量-物质-功效之间关系的基本规律提供了创新性思路与方法，为药对现代研究提供了很好的示范，为指导创新中药与中成药二次开发及中医临床应用做出了突出贡献，产生了显著的社会经济效益。. 1.创建了选择性成分敲除策略与整合效应相结合的中药效应物质辨识技术，从中药整体作用角度辨识并验证了红花及其药对的功效物质基础：基于红花、丹参等单味中药效应物质研究，借鉴生物学领域的基因敲除策略，创建了选择性成分敲除与整合效应相结合的中药效应物质辨识技术，从中药整体作用角度辨识并验证了红花及其药对的功效物质，发现红花活血化瘀作用的主要功效物质是醌式查尔酮碳苷和含7-羟基的黄酮醇苷类成分；并进一步研究发现活血主要效应物质在红花系列药对中的作用贡献增强，且不同配伍条件下作用贡献有较大差异，一定程度上阐明了药对不同配伍的效应物质变化规律。. 2.基于现代药理学与系统生物学方法与技术，首次科学地阐明了丹参-红花药对配伍优效作用与相关分子机制：通过现代药理学研究发现丹参-红花药对及其单味药均有显著地抗氧化、抑制血小板聚集和抗凝血作用，配伍后活血化瘀效应增强，体现出协同增效作用。不同剂量丹参-红花药对急性心肌缺血大鼠的心肌酶、氧化水平、血管内皮功能、炎症反应、血小板聚集和能量代谢异常具有保护改善作用，除MDA水平外，丹参、红花配伍对急性心肌缺血具有活血化瘀协同增强作用，可能与其降低肌钙蛋白I、心肌酶含量，抑制脂质过氧化和保护血管内皮细胞功能有关。运用比较代谢组学方法，发现丹参-红花药对及其单味药均可调节紊乱的生物标志物向正常转归，丹参、红花及其药对组比较，丹参-红花组中葡萄糖、熊去氧胆酸、溶血卵磷脂LysoPC(20:4)、LysoPC(22:6)、LysoPC(18:0)、棕榈酸、硬脂酸回调趋势更显著，丹参-红花药对的活血化瘀整体效应优于单味药。. 通过项目实施在国内外学术刊物发表论文21篇，其中SCI收录15篇；申请并获得国家发明专利4项；培养硕/博士研究生6名。项目成果转化应用产生显著经济社会效益，申请并获得2019年陕西高等学校科学技术奖一等奖。