膜联蛋白B1融合载体及纯化体系的建立

膜联蛋白B1(Annexin B1)为本课题组首次克隆并命名的新的膜联蛋白亚家族成员。研究证实它具有可逆的钙依赖性磷脂结合活性。磷脂双分子层是细胞膜的重要组成成分，细胞膜破坏后，磷脂释放到溶液中形成大量的脂质体。加入钙离子，膜联蛋白B1与磷脂结合而沉淀下来；加入钙离子鳌合剂EDTA，重组蛋白重新溶解，提示着膜联蛋白B1有可能作为新的融合标签用于重组蛋白的分离和纯化。本课题通过研究膜联蛋白B1的钙依赖性磷脂结合的内在机制，摸索其亲合力及与Ca2+、磷脂结合的摩尔比；通过构建蛋白序列缺失突变体，对其活性结构域优化，选出仍然保留活性的突变体作为融合标签；然后以该区段构建融合表达载体，分离和纯化表达的重组蛋白并对纯化条件和步骤进行优化，从而建立一种处理量大、简便快速、易于操作、成本低廉的蛋白分离和纯化方法，不仅可以运用于实验室的分析摸索阶段，又可以应用于生物工程制品下游的中试和生产。