膜转运蛋白ABCG4与非小细胞肺癌耐药关系及其机制研究

化疗是肺癌治疗的重要手段，但肿瘤细胞的耐药导致疗效降低。ABC转运蛋白介导药物外排是引起耐药的主要原因。ABCG4蛋白具备外排化疗药潜能，但在肿瘤中的耐药作用未见报道。我们研究显示ABCG4蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）中高表达，并与癌组织化疗耐药成正相关，稳定转染A549细胞后耐药显著增高，推断其与NSCLC耐药有关。由此我们认为:ABCG4可能通过外排化疗药是引起NSCLC耐药的主要原因。本研究拟进一步用多种方法检测NSCLC的ABCG4表达及与化疗耐药相关性，构建稳定表达和干涉ABCG4的肺腺、鳞癌细胞系，比较转染ABCG4前后细胞的耐药性，通过若丹明转运、膜电位变化等探讨ABCG4对化疗药的转运和耐药机制；通过动物实验进一步验证ABCG4在NSCLC中的耐药作用，阐明ABCG4与NSCLC耐药关系及机制，确定可否作为新的耐药标志，为NSCLC耐药研究和临床个体化治疗提供新的思路。

背景：在全世界，癌症致死中，肺癌占主要原因 。非小细胞肺癌占肺癌的85%。多药耐药是肺癌化疗治疗失败的重要原因，ABC介导药物外排是耐药的主要因素，寻找该家族中新的耐药蛋白并阐明其耐药机制十分重要。ABCG4有望成为耐药候选基因。内容：1．检测NSCLC组织中的ABCG4表达与各临床病理特点的相关性；以及ABCG4表达与药物敏感试验结果的相关性，明确ABCG4是否可以作为NSCLC新的耐药标记分子2．建立稳定高表达ABCG4的人肺腺癌A549和肺鳞癌Calu-1细胞系，明确相应的生物学功能3. 通过体外实验证明ABCG4促进细胞的耐药性，探讨相关耐药机制4. 建立对比过表达前/过表达后各成瘤模型，模拟临床进行化疗，观察疗效，证明单因素ABCG4基因的高表达可导致耐药。结果：ABCG4在NSCLC中高表达， ABCG4表达主要定位于细胞胞膜中，腺癌比鳞癌表达高，分化低的比分化高的表达高，表达的高低还与临床TNM分期相关； ABCG4与术后辅助化疗病人的预后相关，ABCG4阳性表达降低了MST，提示ABCG4蛋白可成为NSCLC化疗后重要的预测预后的生物指标；NSCLC组织ABCG4表达与部分药物敏感性存在负相关性(与耐药性成正相关)，表明ABCG4的表达与NSCLC耐药性相关; 经基因和蛋白水平检测，成功转染肺腺癌A549细胞和肺鳞癌Calu-1细胞并高表达ABCG4，ABCG4蛋白主要定位于细胞膜上 ；ABCG4对A549和Calu-1细胞的增殖，迁移、侵袭无明显影响； 高表达ABCG4细胞系对部分化疗药物具有耐药作用 ；初步证实ABCG4耐药作用是通过促进药物外排的方式实现。 意义：ABCG4可能成为NSCLC新的耐药标志物；为个体化化疗提供新思路和方法.