小麦主要致敏蛋白ω-5 醇溶蛋白HLA-DR分子限制性T细胞表位预测与鉴定

Wheat dependent exercise induced anaphylaxis (WDEIA)is a special type of food allergy，patiens will experience severse allergic reaction when they exercise after 4-6 hours eating wheat food. ω-5 gliadin is the major allergen causing WDEIA ,which has been recombined and used for the diagnosis of WDEIA .To a certain extent,the high polymorphisms of HLA-DRB1 gene influence the ability of presentation antigen ,which cause the diffence of T cell response to same allergen component among individuals. In this research,we collect the subjects of WDEIA and the healthy individuals for HLA-DRB1 genotyping by PCR-SBT.We analyze the HLA-DRB1 genotype that is associated with ω-5 gliadin sensitization.The prediction of HLA-DR restricted T cell epitope derived from the ω-5 gliadin is based on the web of Syfpeithy 、MHC-THREAD、 Epipredict、ProPred. We characterized synthetic candidate epitopes in relative HLA -DRB1 genotype positive healthy individuals by using Elispot assay. We evaluate the ability of proliferation of the epitope-specific CD4+ T cell by CFSE staining. Prediction and identification of HLA-DR restricted T cell epitope derived from ω-5 gliadin which is utility in epitope design for the development of HLA based vaccines and antigen-specific immunotherapy.

小麦依赖运动诱发严重过敏反应是食物过敏的特殊类型，患者在食入面食后4-6小时后运动即可发生严重过敏反应，ω-5醇溶蛋白是其发病的主要致敏蛋白。ω-5醇溶蛋白氨基酸序列已确定，并重组用于临床诊断。HLA-DRB1基因的高度多态性在一定程度上影响抗原提呈细胞提呈抗原肽种类以及激活特异性CD4+T细胞的能力，这可能是不同个体对同一蛋白组分产生不同免疫应答的原因。我们通过PCR-SBT方法对HLA-DRB1进行基因分型，分析出与ω-5醇溶蛋白致敏相关的HLA-DRB1等位基因；通过生物信息学方法利用T细胞表位预测网站预测出候选HLA-DR分子限制性T细胞表位，候选表位合成纯化后通过ELISPOT斑点酶联免疫分析技术、流式细胞术、CFSE标记技术对候选表位肽进行功能验证，从而鉴定出优势T细胞表位。ω-5醇溶蛋白HLA-DR限制性T细胞表位鉴定为变应原特异性免疫治疗提供了新的靶点。

小麦依赖运动诱发严重过敏反应是食物过敏的特殊类型，患者在食入面食后4-6 小时后运动即可发生严重过敏反应，ω-5 醇溶蛋白是其发病的主要致敏蛋白。ω-5 醇溶蛋白氨基酸序列已确定，并重组用于临床诊断。HLA-DRB1 基因的高度多态性在一定程度上影响抗原提呈细胞提呈抗原肽种类以及激活特异性CD4+T 细胞的能力，这可能是不同个体对同一蛋白组分产生不同免疫应答的原因。.本课题组在世界首次揭示了中国过敏性休克人群的诱因排序和临床特点；首次报告小麦是中国人群食物诱发严重过敏反应的主要原因。和欧美人群食物诱发严重过敏反应主要是儿童不同，我国食物诱发严重过敏反应的人群主要是成人。.本课题组通过聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）的测序分型方法（sequence based typing，SBT)进行高分辨率HLA-DRB1基因分型，分析出HLA-DRB1*1602 在健康对照组中的等位基因频率显著高于WDEIA组，可能为ω-5醇溶蛋白致敏的保护基因；HLA-RB1*1302在 WDEIA组等位基因频率显著高于健康对照组（0.8%），可能是ω-5醇溶蛋白致敏的危险因素。.本课题组利用生物信息学方法，综合多种相关网络软件预测结果获得ω-5醇溶蛋白T细胞表位。预测出T细胞表位的氨基酸区域为1-35，67-86，148-167，334-351，365-384。候选表位合成纯化后，本课题组通过ELISPOT斑点酶联免疫分析技术、流式细胞术、CFSE 标记技术对候选表位肽进行功能验证，从而鉴定为出ω -5醇溶蛋白优势T 细胞表位肽ω-510-24（氨基酸序列： LAMAMNIASASRLLS）。ω -5醇溶蛋白HLA-DR 限制性T 细胞表位鉴定为变应原特异性免疫治疗提供了新的靶点。