CCR7调控VEGF-C/D-VEGFR-3信号通路促进肺腺癌淋巴管生成的分子机制研究

淋巴管生成在肿瘤淋巴转移中发挥着重要作用，VEGF-C/D-VEGFR-3是肿瘤淋巴管生成的主要信号通路并促进淋巴转移，趋化因子受体7（CCR7）是肿瘤淋巴转移的重要调节因子。我们前期研究发现CCR7可能参与肺腺癌淋巴管生成VEGF-C/D-VEGFR-3的调节，但其分子机理尚未阐明。新近文献表明CCR7可上调p-ERKI/2和p-Akt表达水平，抑制ERK1/2和Akt磷酸化后VEGF-D表达水平降低。本课题以CCR7高表达人肺腺癌细胞A549和裸鼠移植瘤淋巴转移模型为对象，通过CCR7配体刺激、CCR7-siRNA干扰及ERKI/2、Akt和JNK1/2抑制，研究CCR7是否通过PI3K/AKT、GRB2/ERK1/2或CRKⅠ/Ⅱ/JNK1/2信号传导来调控VEGF-C/D-VEGFR-3通路，促进肺腺癌淋巴管生成的分子机理，为今后以CCR7为靶分子的肺癌诊治转化研究提供实验基础。

本研究采用体外与体内实验相结合，通过细胞培养、动物模型建立、流式细胞筛选、划痕实验、Transwell实验、荧光RT-PCR及Western Blot等手段，研究发现：（1）裸鼠左侧背部近腋窝皮下注射A549细胞操作方便，肿瘤易生长，淋巴转移率高，是构建人肺腺癌皮下移植瘤淋巴转移模型的优选方案。（2）经siRNA干扰后，A549细胞的CCR7的基因和蛋白表达水平均明显下调。（3）经siRNA干扰下调CCR7基因表达水平的A549细胞，其粘附、迁移、侵袭等能力均明显减弱。（4）注射稳定低表达CCR7基因的A549细胞建立的肺腺癌裸鼠模型肿瘤生长、淋巴管生成及淋巴转移率明显低于未经干预的裸鼠移植瘤模型。（5）稳定低表达CCR7基因的A549细胞VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的mRNA和蛋白表达水平均明显降低。（6）注射稳定低表达CCR7基因的A549细胞建立的肺腺癌裸鼠模型肿瘤、瘤周及淋巴结VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的mRNA和蛋白表达水平均低于未经干预的裸鼠移植瘤模型。上述结果证实了我们提出的“CCR7可通过VEGF-C/D-VEGFR-3通路调控肺腺癌淋巴管生成”的假说，为探讨CCR7在肺腺癌淋巴管生成及淋巴转移中的作用机制，深化对肺腺癌淋巴转移的理论认识，并为肺腺癌的分子诊断和靶向治疗提供理论依据。