金针菇锌多糖结构解析及其免疫调控作用机理的研究

多糖是近年热点研究的食品功能成分，具有显著的调节机体免疫功能和抗肿瘤作用，同时对正常细胞无毒副作用，在开发新药、功能食品方面具有特殊的优势。金针菇含有多糖并且Zn含量相对较高，其中35%左右的Zn与多糖结合。目前关于锌多糖也有初步的研究，但大多停留在富锌食用菌中锌的生物利用、锌多糖的抗氧化作用等方面，而对于锌多糖的结构分析以及生物活性的研究鲜有报道。本项目通过现代分离手段，获得高纯度、高活性的金针菇锌多糖；体外细胞试验和体内动物实验分析金针菇锌多糖免疫调节活性，通过分析研究免疫调节活性的生理生化指标、免疫调控通路以及转录因子等指标来阐明金针菇锌多糖的免疫调控作用机理；为金针菇锌多糖功能产品的开发提供理论依据。通过本项目的实施为多糖修饰研究以及金针菇锌多糖功能产品的开发提供理论依据，为金针菇的应用开发提供更加广阔的前景，从而促进整个食用菌产业的发展。

微量元素锌在机体内发挥着重要生理功能，微量元素的存在形态与其生物活性密切相关，前期研究基础表明，金针菇中有相当一部分有机锌是与多糖结合的，但目前关于金针菇中锌多糖的研究很少，因此，针对目前的研究现状，本研究从以下几个方面开展了研究：（1）研究了金针菇多糖的酶法和超声波提取工艺，优化了金针菇中锌水提条件，确定了金针菇中锌的分离提取最适工艺，分离制备了锌的可溶态和悬浮态以及有机态、无机态四种形态，并对有机态进一步通分离得到了锌多糖、锌蛋白两种有机锌结合态；（2）采用DEAE 纤维素-52和Sephadex G-100 型凝胶色谱对锌多糖进行了纯化得到了CF1、CF2两种锌多糖，平均相对分子质量分别为890 KDa，1244 KDa分别含有锌191 μg/g，429 μg/g；采用红外光谱、高效液相色谱、核磁共振和X-射线衍射对锌多糖结构进行了分析,CF1主要以β型呋喃糖为主,CF2主要以β型吡喃糖为主，在1640 cm-1附近的峰向低频波数移动表明锌可能与-NH2形成配位键，1100-1010 cm-1之间吸收峰的红移现象表明锌与多糖可能是以螯合态形式存在的;（3）研究了金针菇多糖螯合锌前后（FVP2、FVP3）的免疫调节作用，金针菇多糖（FVP2）能够诱导巨噬细胞，促进巨噬细胞的增殖，而金针菇锌螯合多糖（FVP3）促进巨噬细胞增殖不如螯合前，相反在高浓度时对巨噬细胞有抑制作用；（4）研究了金针菇锌多糖对脂多糖诱导下RAW 264.7细胞炎症模型细胞炎症模型细胞因子INF-γ、 NO、IL-6、TNF-α的作用，确定了金针菇锌多糖的免疫调节作用与减少炎性细胞因子 IL-6、TNF-α、INF-γ、NO 的产生等有关。. 项目研究成果对于金针菇多糖在功能食品以及医药领域的应用奠定了理论基础，对金针菇功能食品的开发具有重要意义。. 本课题自2012年1月起，至2014年12月资助期满。项目资助期间，课题负责人严格按照项目合同任务要求，合理安排项目进度，完成了项目规定的各项任务和指标，达到了预期研究目标。项目经费使用合理、规范。在此期间，相关研究成果被SCI收录期刊发表论文1篇，接收1篇，发表中文核心论文2篇，申请国家发明专利1项，培养硕士研究生2人。