海带多糖L01对心理应激致血管内皮细胞损伤的防护研究

心理应激引起交感神经紧张性提高，肾上腺素（Adr）释放增加，在单胺氧化酶和氨基脲敏感胺氧化酶作用下，肾上腺素代谢物甲醛、过氧化氢生成增多，导致血管内皮细胞（VEC）损伤，引发心脑血管疾病。因此防止Adr过度脱氨和阻碍其代谢产物的毒性作用是保护VEC的一条有效途径。我们在对广西海带多糖L01进行抗血栓的研究中发现L01能够防护大剂量肾上腺素对VEC的损害，那么对心理应激造成的VEC损伤是否也具有防护作用？本项目拟通过建立两种心理应激动物模型，研究心理应激对VEC结构和功能的损害和L01的防护功能；通过代谢酶活性和代谢物-血管内皮蛋白质结合实验，研究L01是否通过影响肾上腺素代谢酶的活性，使毒性代谢物生成减少，还是通过阻碍代谢物与内皮细胞的结合而起防护作用。本项目把心理应激与VEC联系起来，于内源性Adr脱氨途径探求安全有效的血管保护剂。

建立两种心理应激大鼠模型即愤怒心理应激和空瓶刺激模型，研究海带多糖对心理应激致血管内皮细胞损伤的防护作用。实验大鼠随机分为正常组（不应激，ip 生理盐水）、模型组（ip 生理盐水）、海带多糖低剂量组（LP-L，ip LP 1 mg•kg-1）、海带多糖高剂量组（LP-H，ip LP 5 mg•kg-1）及依诺肝素组（ip, 1 IU•kg-1）。结果显示：模型组、LP-L、LP-H 和依诺肝素组行为学评分(垂直平分、水平得分和总分)及血浆肾上腺素水平明显高于正常组(P<0.05）。各组血浆MAO 水平无显著性差异（P >0.05）。LP-L、LP-H 血管组织SSAO 水平明显低于模型组（P＜0.05），LP-H 血浆SSAO 水平明显高于模型组（P＜0.05）。LP-H 组血浆H2O2、甲胺、甲醛浓度低于模型组（P＜0.05）。与正常组比较，模型组血浆NO、6-Keto-PGF1a 水平显著降低，血浆ET 水平显著升高，NO/ET 和6-Keto-PGF1a / TXB2 比例显著降低（P<0.05）。与模型组比较，LP-H 血浆NO、6-Keto-PGF1a 水平显著升高，ET 水平显著降低，NO/ET 和6-Keto-PGF1a / TXB2 比例显著升高（P<0.05）。血管环实验表明，LP-H 使苯肾上腺素（10-6 mol•L -1）预收缩的血管舒张百分比（Ach 浓度为10-5 mol•L-1）明显高于模型组（P<0.05），而血管收缩百分比（NE 浓度为10-6 mol•L-1）明显低于模型组（P<0.05），且与正常组无显著差异。LP-L、LP-H 对L-NAME 孵育后硝酸甘油舒张血管作用无影响，而能降低NE 的血管收缩反应。扫描电镜可见模型组VEC 表面收缩，凹凸不平，细胞间隙明显增大，LP使血管内皮表面及细胞间隙得到较好的改善；透射电镜可见模型组VEC 的线粒体嵴模糊，部分线粒体出现空泡，LP-H VEC 的线粒体嵴清晰，膜完整，无空泡。TUNEL 染色法观察到模型组、LP-L、LP-H、依诺肝素组均出现VEC 凋亡，LP-H 的VEC凋亡率明显小于模型组（P< 0.05）。