miR-203靶向SOCS3调控IL-17诱导的角质形成细胞增殖在银屑病发病机制中的研究

Keratinocyte proliferation is one of the most important factors to the pathogenesis of psoriasis. Suppressor of cytokine signaling（SOCS) regulates the proliferation of keratinocyte by negative regulation of IL-17 induced signal transduction pathways, however, the mechanisms are not fully elucidated. Our previous studies found JAK/STAT pathway was activated, with up-regulation of miR-203 and down-regulation of SOCS3. Binding site of miR-203 in 3’UTR of SOCS3 was predicted, and accordingly, the hypothesis was proposed that miR-203 plays a key role in keratinocyte proliferation, through SOCS3 related negative regulation of IL-17 induced signaling pathways. This study aim to confirm the binding site of miR-203 to 3’UTR of SOCS3 with luciferase reporter gene expression system. Effects of miR-203 on SOCS3 and IL-17 induced signaling pathways will be further investigated, to elucidate the mechanisms beneath the pathogenesis of psoriasis.

角质形成细胞增殖是银屑病发病机制的重要环节，细胞信号转导抑制因子（SOCS）可通过负向调控IL-17介导的信号通路来影响角质形成细胞的增殖功能，但具体调控机制不清。申请者前期研究发现，利用IL-17刺激小鼠皮肤后，JAK/STAT通路激活，SOCS3表达下降，miR-203表达增加。理论预测发现SOCS3 mRNA的3’UTR存在miR-203结合位点。因此，我们提出 miR-203通过调控SOCS3表达与功能，影响IL-17诱导的角质细胞增殖进而影响银屑病发生发展的假说。本项目拟通过Luc报告基因表达系统，分析并验证miR-203与SOCS3 mRNA-3’UTR区的直接作用和关键结合位点；分别在IL-17刺激的HacaT细胞以及小鼠皮肤中抑制miR-203表达，分析SOCS3表达变化以及对IL-17诱导的角质细胞增殖功能的影响，增强对银屑病发病机制的认识，为临床上提供干预手段打下基础。

摘要：银屑病是一种以真皮血管分布增多和角质形成细胞过度增殖为特征的一种慢性皮肤病，白介素（IL）17信号在银屑病的发病和发展过程中起着非常重要作用。 microRNA（miR）203在皮肤中优先表达，是角质形成细胞分化的重要调节因子。 miR-203已被证实与包括银屑病在内的多种皮肤疾病相关。然而，miR203在IL17诱导的血管内皮生长因子（VEGF）分泌中的作用尚未得到阐明。本研究表明，在IL17刺激的小鼠耳细胞和IL17处理的人源性角质形成细胞（HaCaT细胞株）中，miR 203表达水平上调（P <0.05）。此外，与HaCaT细胞中观察到的结果一致，miR 203的抑制显着减弱了IL-17诱导的VEGF水平上调并显着抑制了HUVECs的管形成（P <0.05），这也意味着IL-17-诱导的miR-203表达增加激活了JAK信号转导和转录通路的激活剂，并促进了HaCaT细胞中VEGF的分泌。此外，通过western- blot分析检测蛋白质表达水平，结果显示：与IL 17刺激的和抑制剂对照转染的细胞相比，miR 203抑制剂转染的细胞中，pJAK2和p STAT3的表达水平显著降低。相比之下，SOCS1（JAK2 / STAT3信号传导途径的另外的抑制剂）的蛋白质表达水平不受miR 203抑制的显著影响。通过TargetScan v7.1，我们预测miR 203可能将SOCS3的3'非翻译区（UTR）中作为靶向序列，我们的实验结果观察到miR 203可以与3'非翻译区抑制细胞因子信号3（SOCS3）结合并抑制SOCS3表达。综上，我们认为IL17诱导miR203表达，随后通过靶向作用于SOCS3来增加VEGF分泌。本研究旨在进一步探讨miR 203在银屑病发病机制中的作用，提出对其作用机制的新颖思路以及鉴定某些用于治疗银屑病的潜在治疗策略。本项目资助发表成果3项，其中SCI论文一篇，中文核心论文一篇，联合培硕士生毕业论文一篇。待发表两篇。项目投入经费21.8500万元，各项支出基本与预算相符。剩余经费9.0114万元，剩余经费负责后续研究的支出。