花生主要过敏原Ara h1与抗体相互作用机制的研究

本研究运用生物分子相互作用分析（BIA）方法，选用主要食品过敏原花生，在已克隆、表达和纯化花生主要过敏原Ara h1的基础上,运用表面等离子体共振（SPR）技术，研究其与目标抗体分子之间的相互作用。通过研究花生主要过敏原（Ara h1）抗原分子在SPR传感片表面的吸附（或固定）、解离以及与免疫球蛋白抗体（IgE及IgG）、单克隆抗体和多克隆抗体之间的结合-解离过程，获得花生过敏原(Ara h1)与不同类型抗体之间的结合位点、结合常数以及解离常数等参数，在分子水平上进一步探讨花生主要过敏原的致敏机理，以及进一步阐明临床过敏性疾病诊断的原理和途径。.该研究基于抗原－抗体之间的特异性相互作用，通过捕获有特异性作用的抗原或者抗体分子，大大降低了生物分子之间非特异性作用的影响，不论是在未知过敏原的检测、过敏性疾病的临床诊断、还是在过敏性疾病发病机理的研究方面都具有重大意义。

本研究运用阴离子交换层析法分离纯化花生主要过敏原Ara h1蛋白，经酶联免疫印迹法检测其与花生过敏患者血清中IgE的结合能力，实验结果表明该方法纯化出的Ara h1蛋白具有良好的免疫学活性。以方法纯化的Ara h1为配体制备亲和层析柱，然后和Protein A亲和层析柱分离出了人血清中抗Ara h1特异IgG与IgE。在此基础上，运用表面等离子体共振（SPR）技术，将纯化的花生Ara h1分别与其特异抗体IgG与IgE进行表面等离子体共振实验，检测二者之间的相互作用性，研究花生主要过敏原（Ara h1）抗原分子在SPR传感片表面的吸附（固定）、解离以及与免疫球蛋白抗体（IgE及IgG）与抗原之间的结合-解离过程，获得花生过敏原(Ara h1)与不同类型抗体之间的结合位点、结合常数以及解离常数等参数，研究结果表明通过SPR技术能够明显得检测到Ara h1与其人血清中的特异抗体IgE与IgG的结合信号，将Ara h1固定在传感器芯片上，检测多个已知浓度的相应抗体，由结合信号与相应浓度绘制标准曲线，可以通过检测患者血清中与Ara h1的结合信号强度对花生过敏疾病进行诊断，在分子水平上探讨花生主要过敏原的致敏机理以及临床过敏性疾病诊断的原理。同时，我们模拟胃肠道消化研究了胃蛋白酶与胰蛋白酶对花生免疫反应性的影响，初步了解了消化酶对花生总蛋白的消化特性，同时研究了消化酶对花生过敏原免疫反应性的影响，为制造生产低致敏花生产品提供理论依据。我们综合运用圆二色光谱、荧光光谱、酶联免疫吸附等实验对花生过敏原蛋白的酶水解反应、高温热变性以及糖基化反应的导致蛋白结构变化和免疫反应性影响进行了系统的研究，初步构建了一种研究Ara h1美拉德反应的光谱学方法，并为进一步研究美拉得反应过程对蛋白结构与功能的影响提供了理论依据，对开展低致敏花生研究奠定了基础。