MIA基因TRS调控一新的自杀基因系统靶向治疗黑素瘤的研究

本研究以黑素瘤特异性高表达的Melanoma-inhibiting activity (MIA)蛋白基因转录调控序列（TRS）为调控元件，设计一新的受其调控的自杀基因前体药物系统- - 蒜氨酸酶基因（Alliinase）/蒜氨酸（Alliin）系统，体外黑素瘤细胞水平和建立黑素瘤荷瘤动物模型水平，用缺陷型腺病毒将该自杀基因前体药物系统导入黑素瘤细胞后，特异性表达产生蒜氨酸酶，给予前体药物蒜氨酸后，将前体药物蒜氨酸转化形成细胞毒性药物蒜素（Allicin），检测对黑素瘤细胞生长增殖、细胞周期及凋亡的影响，观测对黑素瘤细胞的选择性杀伤作用。

本研究以黑素瘤特异性高表达的Melanoam-inhibiting activity(MIA)蛋白的转录调控序列(TRS)为调控元件，成功设计受其调控的蒜氨酸酶（Alliinase）基因表达系统，用缺陷型腺病毒将该系统导入体外培养的黑素瘤细胞(A375、A875和B16-F1)后，可特异性表达产生蒜氨酸酶（Alliinase），给予前体药物蒜氨酸(Alliin)后，可以发现对黑素瘤细胞有显著的杀伤效应，并与病毒量和前体药物浓度有相关性。建立黑素瘤细胞（B16-F1）荷瘤鼠C57B6和黑素瘤细胞(A375、A875）Balb/c裸鼠动物模型，用缺陷型腺病毒将该系统导入肿瘤中，分别通过尾静脉和腹腔给予前体药物后，可以观察到该系统对荷瘤动物模型肿瘤生长的抑制作用。. 此外，本研究组还完成了以下初步探索。. 本课题组还研究雷公藤内酯醇在体外抑制人黑素瘤细胞A375增殖和迁移能力的效应以及对细胞表面趋化因子受体CCR7表达的影响，初步探讨该效应可能相关的机制。结果示雷公藤内酯醇以剂量依赖方式抑制A375细胞的增殖，24h的IC50值为0.20μg/ml；雷公藤内酯醇能显著地抑制A375细胞的体外迁移能力(P<0.01)，侵袭抑制率约为82.84%；经不同浓度雷公藤内酯醇(0, 0.2, 0.4μg/ml)处理后，A375细胞中CCR7蛋白表达呈明显下降趋势(P<0.05)。此研究显示雷公藤内酯醇具有抗A375细胞增殖和体外迁移能力的作用，其机制可能与下调其表面趋化因子受体CCR7的表达相关，并且该作用呈一定的浓度依赖性。.研究小鼠黑素瘤B16F10细胞或组织中six1、VEGF-C mRNA及蛋白的表达情况，探讨six1基因在小鼠黑素瘤中淋巴管生成及转移中所发挥的作用。结论 ①Six-shRNA能有效抑制six1 mRNA和蛋白的表达。②在小鼠黑素瘤中six1、VEGF-C蛋白存在过表达。③VEGF-C mRNA和蛋白表达随six1表达增加而增加，提示six可能与VEGF-C表达有关。④six1可能在肿瘤发生发展、淋巴转移中具有重要作用。⑤six1、VEGF-C有可能作为黑素瘤基因治疗的重要靶点。