新城疫病毒HN蛋白茎区突变体构建及其生物学特性研究

新城疫病毒血凝素神经氨酸酶蛋白(HN)由球状头部和茎区部分组成，球状头部的结构和功能研究较为深入，但茎区氨基酸序列调控病毒生物学特性的分子机制尚未完全清楚。本项目用新城疫病毒作为病毒研究对象，拟对HN茎区HR之间的居间序列进行突变，构建7-10个HN突变体，运用流式细胞、Content-mixing和免疫共沉淀等技术手段，对野生型和突变型HN蛋白进行受体结合、神经氨酸酶和细胞融合等特性的比较分析，揭示居间序列对HN蛋白生物学功能的影响；并利用反向遗传技术平台进行病毒拯救，获得同时表达eGFP和HN 蛋白的重组突变型病毒，通过病毒复制动力学分析、SPF动物实验和组织病理学等技术的运用，分别从不同角度系统解析居间序列变异对HN蛋白功能、病毒感染性和致病性调控作用的分子机制。为研制和开发新型靶向抗病毒药物或小分子抑制剂以及减毒活疫苗提供理论依据。

新城疫病毒血凝素神经氨酸酶蛋白(HN)由球状头部和茎区部分组成，球状头部的结构和功能研究较为深入，但茎区氨基酸序列调控病毒生物学特性的分子机制尚未完全清楚，已有研究结果也有待进一步验证和解析。本项目以基因Ⅶ型新城疫病毒G7株作为研究对象，对 HN 茎区HR之间的居间序列进行突变，构建6 个 HN 突变体，对野生型和突变型 HN 蛋白进行细胞表面表达、受体结合、神经氨酸酶和细胞融合等特性的比较分析，验证了居间序列突变对 HN 蛋白生物学功能的影响。进一步，利用反向遗传技术进行病毒拯救，获得5株HN 突变型和野生型新城疫病毒，通过病毒复制动力学分析和SPF 动物实验等技术从不同层面、系统解析居间序列突变对病毒感染性和致病性等生物学特性的影响。结果表明，茎区HR居间序列突变降低了病毒在BHK-21细胞上的增殖活性，同时病毒对SPF鸡有毒力致弱作用，并降低了病毒的感染性。本课题系统研究了HN蛋白居间序列突变对蛋白和病毒生物学特性的影响，为深入研究副黏病毒的膜融合机制拓展了思路，为NDV新型疫苗的研制及靶向小分子药物的开发积累了实验数据，提供了理论依据。