络衡方调节补体攻膜复合物C5b-9生物活性表达的物质基础研究

络衡方源于《太平圣惠方》，由心内科知名专家王显、胡大一治疗急性冠状动脉综合征（ACS）所提出的"络风内动"学说进一步形成，前期临床研究发现其对ACS斑块具有很好的稳定效果，进而能有效防治ACS。补体攻膜复合物C5b-9沉积已是动脉粥样硬化病灶的一大特点，C5b-9具有细胞溶破的生物活性，与斑块的稳定性密切相关。为探讨络衡方调节C5b-9的药效物质基础，首次于体外在血管内皮细胞上组装C5b-9形成动脉粥样硬化的典型细胞病理模型，应用中药血清药物化学的方法，将单个血清移行成分作用于该细胞模型，通过对细胞形态学（定性指标）和特征炎症因子释放量（定量指标）来考察移行成分对C5b-9的调节作用，然后对具有调节活性的成分结合LC-DAD-MS/MS、NMR等现代波谱学加以结构确认，最终阐述络衡方调节C5b-9生物活性的物质基础。通过该课题的研究将对与C5b-9相关疾病的药物机理研究提供一定的指导意义。

通过对所建立的高血脂大鼠病理模型的治疗发现，络衡方能够显著改善高血脂大鼠血液流变学状态，一方面可以通过调节谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、低密度脂蛋白、总胆固醇、甘油三酯等血脂的相关指标来改善血瘀状况，另一方面又可以通过调节血液流变学相关指标来治疗血瘀证状。利用LC-MS和GC-MS联用技术，对络衡方和含药血清的化学成分研究，共鉴定了18个化合物，并确认在含药血清中没有发现徐长卿的主要成份丹皮酚原形化合物，而检测到安息香的主要成份苯甲酸。一方面说明丹皮酚本身化学性质不稳定被体内代谢，另一方面也显示出苯甲酸在进入体内后可能是络衡方的一个主要入血液的药效成分。利用激光共聚焦检测技术，首次在血管内皮细胞壁上人工组装出C5b-9病理模型，这为研究ACS发病机理和治疗提供了一个有效的基础。通过调整组装的剂量，利用血管内皮细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放剂量的变化和细胞凋亡情况，进一步摸索出C5b-9对血管内皮细胞的亚溶剂量为小于等于1.6μg/ml。对所组装的C5b-9病理细胞模型添加络衡方的不同剂量提取物，发现其对TNF-α、IL-8和LDH等细胞因子的释放有着一定的抑制作用，说明在这样的药物环境下，的确提高了细胞对C5b-9的耐受性。另外发现，在所有的数据中，安息香的提取物或者其有效成分苯甲酸，在各项细胞因子的检测中效果最好，而它也恰恰是检测到的入血成分，这在阐述络衡方的药效学方面也提供了证明。通过该课题研究，证明了络衡方宏观上对ACS的血液流变学状态有着显著地治疗效果，微观上对于动脉粥样硬化病灶的一大特点补体攻膜复合物C5b-9 沉积有着抑制作用，这些研究成果对与C5b-9 相关疾病的药物机理研究也提供了一些思路。