PGRMC1对激素依赖性乳腺恶变风险作用机制及早期血液筛查分析方法的研究

Menopause Hormone Therapy(MHT) is the most effective treatment to menopausal symptoms and chronic disease, but it has the risk of increasing breast cancer. If we find out the action mechanisms of MHT increasing risk of breast cancer, we can take effective measures as soon as possible. Our previous in vitro experiment found that overexpression of PGRMC1 increased the risk of breast cancer cells during estrogen and/ or progestin treatments, and preliminary clinical trials also found PGRMC1 was highly expressed in breast cancer tissues. This suggests PGRMC1 plays an important role in malignant proliferation of breast cancer. In this application, firstly, we should confirm the relationship between PGRMC1 and proliferation of breast cancer. Secondly, we may illustrate its possible mechanisms by selecting regulatory proteins of PGRMC1 with reverse phase array analysis. Finally, we will create early blood screening analysis method of PGRMC1 with silver nano materials. It is a promising that PGRMC1 serves as a potential tumor biomarker of breast cancer risk in the future.

激素治疗是防治绝经相关症状及慢性病最有效的方法，但可致乳腺癌风险增加，其机制不清。我们前期研究发现：转染孕激素受体膜组分1（PGRMC1）的乳腺癌细胞在孕激素或雌孕激素刺激下可出现显著增殖, ERａ抑制剂可以抑制其增殖；乳腺癌组织中PGRMC1高表达且与ERａ相关。推测：PGRMC1与激素诱导乳腺癌恶性增殖相关，且可能是通过雌激素受体相关信号通路调节的；但这些发现都需进一步的明确。PGRMC1如能发展为激素治疗前常规筛查的乳腺癌风险标志物将有重要意义。本项目拟通过在体动物和乳腺癌组织，采用免疫组化法明确PGRMC1与乳腺癌增殖间的关系；应用反向蛋白芯片筛选出PGRMC1调控蛋白，比较体内外不同雌孕激素刺激下相关蛋白表达水平及信号通路的变化，初步阐明PGRMC1的调控机制；最后制备荧光配基结合银纳米材料，创建早期筛查痕量PGRMC1的血液检测方法，为其发展为临床乳腺癌风险标志物奠定基础。

绝经是每位女性必须经历的生命阶段，是自然过程，但会导致病理性结果，影响绝经女性的生活质量及各种雌激素缺乏相关慢性病的发生。激素治疗是防治绝经相关症状最有效的方法还可以明显降低绝经相关慢性病的发生，但可导致乳腺癌风险的增加，其机制不清，因此国际绝经学会号召对激素致癌特别是乳腺癌风险问题进行深入研究。我们前期体外研究发现：孕激素受体膜组分1（PGRMC1）过表达可以显著促进乳腺癌细胞在某些合成孕激素或雌、孕激素刺激下的增殖。本项目拟通过体外研究、在体动物实验和临床研究，明确PGRMC1与乳腺癌增殖间的关系；PGRMC1促进乳腺癌细胞增殖的调控机制；建立血液PGRMC1的检测方法。结果：1.体外研究证明：过表达PGRMC1的乳腺癌细胞系在某些合成孕激素或雌、孕激素刺激下明显增殖；2.在体动物实验：首次发现在雌二醇联合合成孕激素炔诺酮刺激下可明显促进去势和未去势裸鼠过表达PGRMC1的乳腺癌异种移植瘤的增殖，而联合天然黄体酮没有促进此肿瘤额外增殖；3.临床研究：乳腺癌组织中PGMRC1明显高表达，其阳性表达与肿瘤直径、淋巴结转移、复发呈明显正相关，PGRMC1表达越高，其预后及远期生存率越差。.4.机制研究：通过体外细胞模型，体内裸鼠成瘤模型和临床研究均证明PGRMC1促进乳腺癌的发展，对其机制研究发现雌孕激素（尤其是E2+NET）诱导的MCF-7细胞增殖与PGRMC1高表达和其第181位丝氨酸磷酸化有关。进一步研究表明，CK2与PGRMC1相互作用，介导了PGRMC1-ser181位点的磷酸化，从而促进了乳腺癌细胞的快速增殖。PGRMC1 Ser181点突变后，PGRMC1促进AKT、ERK磷酸化活化的能力显著降低，证明CK2介导的PGRMC1第181位点的磷酸化对激活AKT通路促进乳腺癌增殖至关重要。5.创建了微流控荧光免疫检测血液中PGRMC1的方法。检测全血中PGRMC1的线性范围为20 pg/mL-358 ng/mL，检测限（LOD）5 pg/mL。6.临床乳腺癌患者血液中PGRMC1水平明显高于正常对照组，且血液中PGRMC1水平与乳腺癌组织中的阳性表达明显正相关（r=0.793，P<0.01）。提示：测定血液PGRMC1浓度可以代替检测乳腺组织中的PGRMC1。此研究，为将PGRMC1发展为临床新的乳腺癌风险标志物奠定了坚实的科学基础。