用基因拷贝数直接定量快速诊断缺失型α-地贫

根据α珠蛋白基因缺失及缺失数目是α-地贫临床分型依据的发病分子机制理论，利用连接酶反应及多重TaqMan实时荧光PCR技术，采用定量检测α珠蛋白基因拷贝数的方式，以直接分析是否有缺失、缺失数量、及多拷贝(CNVs)的分子诊断策略，有效解决由缺失类型遗传异质性导致的假阴性及小量外源污染引起的假阳性等技术瓶颈，实现缺失型α-地贫及α珠蛋白基因CNVs快速分子诊断。通过本项目的研究，从理论上建立一种"基于目的基因拷贝数直接定量"的缺失型α-地贫分子诊断新途径；从方法学上建立一种准确可靠、简单实用、高通量低成本，易于实现自动化和规模化检测的分子诊断新方法，满足当前α-地贫防治大规模人群筛查和常规分子诊断方法学需要，也为其它基因缺失型遗传病的分子诊断方法学研究提供借鉴。

通过本研究，从理论上建立了一种“基于目的基因拷贝数直接定量”的缺失型α-地贫分子诊断新途径；从方法学研究上建立两种基于此理论的缺失型α-地贫分子诊断新方法。按本项目的研究方案，先期建立了一种基于模板连接探针预处理的三重TaqMan实时定量荧光PCR缺失型α-地贫分子诊断新方法，发表了研究论文（Zhou WJ, et al. Anal Biochem. 2012; 427:144-50），获得了技术发明专利授权（ZL 201210090055.7）；随后，为了简化操作、降低成本，建立了另一种基于加尾引物模板预扩增的四重TaqMan实时定量荧光PCR缺失型α-地贫分子诊断新方法，发表了研究论文（Zhou W, et al. JMD. 2013;15:642-51），获得了技术发明专利授权（ZL 201110081598.8），并成功实现专利转让及成果转化，即将获得临床诊断试剂批号而进行临床扩广应用。. 本项目建立的分子诊断新方法，准确可靠、简单实用、高通量低成本，易于实现自动化和规模化，可满足当前α-地贫防治大规模人群筛查和常规分子诊断方法学需要，也为其它基因缺失型遗传病的分子诊断方法学研究提供借鉴。达到了本项目的预期研究目标。. 在本项目建立目的基因拷贝数直接定量技术途径与技术平台过程中，另申请了技术发明专利一项（201210090061.2），发表核心期刊研究论文1篇（袁晓文等.中华检验医学杂志，2011; 34:681-686）。并培养了博士和硕士研究生各两名。