猪瘟病毒p7蛋白的离子孔道功能及其在病毒增殖中的作用

病毒离子孔道蛋白能够在生物膜结构上形成亲水性孔道，改变膜的通透性，在病毒的成熟装配和释放过程中发挥重要作用，有关猪瘟病毒离子孔道蛋白的研究未见报道。本项目以猪瘟病毒非结构蛋白p7为研究对象，通过深入研究p7蛋白对大肠杆菌的细胞毒性、p7蛋白的亚细胞定位、p7对原核细胞和真核细胞膜通透性的影响和p7蛋白的寡聚化及孔道形成等生化特性，明确p7的离子孔道属性；通过研究病毒离子孔道抑制剂BIT225等对病毒复制增殖的影响，间接反映p7在病毒增殖中的作用；通过构建全长和缺失p7或突变p7关键氨基酸的猪瘟病毒感染性cDNA，进一步研究p7对病毒RNA复制和病毒包装、释放等的影响，为深入研究猪瘟病毒出芽释放机理奠定基础。

本项目以实验中偶然发现的大肠杆菌中表达的猪瘟病毒P7蛋白可以使大肠杆菌生长延迟、大肠杆菌细胞膜通透性增加等实验现象为切入点，分别在原核细胞、真核细胞内过表达P7蛋白，从蛋白水平、细胞水平、病毒水平等多角度深入研究了P7蛋白具有的离子孔道蛋白特性及其拓扑结构。最终证明了P7对大肠杆菌的细胞毒性作用；确定了P7表达早期定位于PK15细胞内质网，晚期定位于细胞膜；表达的P7蛋白在PK15细胞内质网膜上氨基端和羧基端均透膜；P7蛋白可以增强大肠杆菌细胞膜和PK15细胞细胞膜通透性；纯化的P7蛋白在戊二醛的作用下可以同源寡聚，其同源寡聚体最多检测到5聚体；过表达P7蛋白的PK15细胞感染猪瘟病毒后其病毒量高于对照组。本项目从离子孔道蛋白特性入手研究P7蛋白的性质、功能以及P7的拓扑结构。同时初步发现P7在PK15细胞内可以引起细胞凋亡和自噬，具体机制有待研究。这些研究都为深入研究P7蛋白在PK15内的功能、深入研究P7蛋白在猪瘟病毒逃避宿主免疫监视中的作用、为进一步研究猪瘟病毒出芽释放机理奠定基础。最终发表sci文章1篇，影响因子4.24，中文核心期刊一篇。在整理sci文章1篇。