eIF2α信号通路对小体积肝移植早期肝功能损伤的作用及机理研究

活体肝移植中新肝初期过高的门静脉压力是影响新肝功能恢复的重要原因。但是目前临床上对如何降低门静脉高压引起的一系列化学物质的释放，防止早期肝损伤仍缺乏有效手段。本课题应用肝细胞培养和小体积大鼠肝移植模型，进行eIF2α信号途径中相关基因和蛋白的检测，通过干预eIF2α磷酸化观察其对eIF2α下游基因ATF4,CHOP的mRNA表达的影响，同时进行肝组织和细胞损伤情况，肝脏分泌功能以及炎症反应的观察，以及关于门静脉高压对小体积肝移植早期eIF2α相关基因的表达及肝脏组织形态结构和功能的影响的研究探索，证明eIF2α信号途径在小体积肝移植早期的肝功能损伤中起很重要的作用，本课题尝试从内质网亚细胞水平阐明小体积肝移植新肝早期的肝损伤的机制，首次提出门静脉高压可能通过激活肝窦内皮细胞的eIF2α的磷酸化，诱导CHOP基因的表达，促进肝损伤的机制，为以后从分子、细胞水平治疗小体积肝移植早期肝损伤奠定基

在本课题组人员的共同努力下，圆美完成了课题任务。.通过体外培养原位大鼠肝细胞，观察肝细胞不同生物学行为及目的基因PERK, eIF2α,CHOP的表达，PERK， eIF2α磷酸化蛋白表达，及培养液中乳酸脱氢酶(LDH), 白蛋白及尿素的检测，评估了肝窦内皮细胞PERK,eIF2α的激活对肝细胞凋亡及功能的影响；通过在肝细胞、肝窦内皮细胞共同培养组加入eIF2α磷酸化诱导剂，观察了肝细胞不同生物学行为 ，及目的基因CHOP的表达， eIF2α磷酸化蛋白表达，及培养液中LDH浓度，评估了肝窦内皮细胞eIF2α磷酸化对肝细胞凋亡及功能的影响。应用小体积大鼠肝移植模型，进行了eIF2α信号途径中相关基因和蛋白的检测，通过干预eIF2α磷酸化观察其对eIF2α下游基因ATF4,CHOP的mRNA表达的影响，同时进行肝组织和细胞损伤情况，肝脏分泌功能以及炎症反应的观察，以及关于门静脉高压对小体积肝移植早期eIF2α相关基因的表达及肝脏组织形态结构和功能的影响的研究探索。我们发现小体积肝移植术后早期门静脉压力增加明显，并影响早期肝功能的恢复。早期肝组织中PERK/eIF2α/ATF4途径明显激活，并且与门静脉压力、早期肝功能有密切关系。阻断eIF2α磷酸化可改善小体积肝移植早期肝损伤作用，诱导eIF2α磷酸化可恶化早期肝损伤作用。该实验明确了eIF2α信号途径在小体积肝移植早期肝损伤的作用。其结果能够为临床上预防小体积肝移植早期肝损伤提供一个新的靶点及理论依据。.在此课题实验结果上，已发表SCI文章一篇，还有一篇在投稿中。