维生素D相关蛋白VDUP1对气道上皮细胞调控哮喘炎症关键分子TSLP的影响

气道上皮细胞（AEC）在哮喘的发病中处于关键地位，AEC衍生的胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）启动和促进了哮喘的炎症表型。维生素D与哮喘密切相关，VDUP1是维生素D3上调蛋白，通过对细胞内信号通路的调控参与了细胞的氧化应激和免疫调节，但对AEC分泌功能的影响，相关研究较少。本课题采用基因过表达和RNA干扰手段，通过质粒转染细胞模型，利用实时荧光定量PCR、Western blot和ELISA等技术，在基因和蛋白水平研究维生素D相关蛋白VDUP1对AEC调控哮喘炎症关键分子TSLP的影响，并利用信号通路抑制剂和转录因子受体拮抗剂研究相关的信号通路机制。同时，应用携带VDUP1或siVDUP1的腺病毒载体转染哮喘动物模型，进一步观察VDUP1对TSLP的影响在机体水平的表现。为探索哮喘治疗的新靶点和新思路提供科学的理论依据。

气道上皮损伤及炎症介质如TSLP表达和释放是哮喘发生的始动环节。PAMPs和DAMPs如HMGB1的协同作用在哮喘发病中意义重大。维生素D证明参与了气道固有免疫和获得性免疫平衡功能。本课题主要评价维生素D对TSLP的调控作用及机制，探讨维生素D对粘膜屏障的保护作用。探讨HMGB1和HSP70在哮喘的诊治意义及参与上皮损伤和炎症介质释放的作用及可能机制。.主要结果：.（1） 临床研究：1、HMGB1在哮喘和COPD诱导痰和血清中显著增加，HMGB1水平与疾病严重程度及中性粒细胞炎症相关。HMGB1水平在COPD病人更高，具有鉴别意义；2、HSP70在哮喘病人血清中显著增加，与疾病严重程度及中性粒细胞显著相关；3、哮喘病人气道粘膜VDUP1显著高表达；4. 血清细胞因子谱可以识别出具有显著临床特征的哮喘表型。哮喘病情主要取决于促炎细胞因子与抗炎细胞因子间平衡状态;6.混合型哮喘代表了一组病情较重的哮喘亚型，可能与GM-CSF、IL-8、leptin、VEGF等因子有关。.（2）体外实验.1、维生素D均可显著增加TSLP表达，VDUP1干预后可显著抑制TSLP表达；2、RSV可以促进上皮TSLP表达和释放，TLR3途径参与介导作用；3、DMSO可增加气道上皮细胞TSLP表达；4、维生素D可以显著增加屏障蛋白表达，也可显著增加上皮跨膜电阻；5、屋尘螨及RSV可以显著增加气道上皮通透性，通过VEGF拮抗剂可以显著抑制通透性的增加；6、氧化应激可增加气道上皮细胞HMGB1的表达和释放；8、 HMGB1可促进气道上皮细胞IL8表达和释放，且与IL1B具有协同作用。9、IL1B可以增加上皮通透性，但HMGB1未表现明显的协同作用；10、维生素D可以抑制屋尘螨诱导气道上皮通透性增加，这与干预VEGF途径有关。.（3）动物实验：1、哮喘组支气管组织中VDUP1、VDR 和CYP27B1 水平显著增加。2、HMGB1在RSV及OVA模型中均显著增加，RSV可增加粘膜TSLP的表达，利巴韦林具有抑制效果。3、TDI哮喘模型中存在上皮损伤和增生特点，可引起上皮E钙粘蛋白分布紊乱，用地塞米松具有显著的抑制效果。维生素D可抑制中性粒细胞炎症，减低气道高反应性，也可抑制上皮粘膜屏障破坏。4、TDI模型中HMGB1表达增加，丙酮酸乙酯可显著抑制中性粒细胞炎症，也可显著TDI对于粘膜损伤.